Seleção de actinomicetos isolados de liquens da região Amazônica produtores de inibidores de β-lactamases e sua atividade antimicrobiana frente a isolados de mastite bovina - CUNHA, Márcia Nieves Carneiro da (2010)
A mastite bovina é uma das principais enfermidades que acometem os rebanhos leiteiros no mundo, sendo considerada um obstáculo à sua exploração lucrativa. As maiores perdas causadas pela mastite são devidas à diminuição na produção de leite, depreciação na qualidade nutritiva, custo de tratamento, custo de atendimento veterinário e laboratorial e perdas no potencial genético. Vários microorganismos são citados como agentes etiológicos da mastite bovina sendo que as espécies mais frequentemente isoladas são Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis e Escherichia coli. Os antibióticos β-lactâmicos são importantes agentes antibacterianos, porém sensíveis às enzimas β-lactamases, capazes de clivar o anel β-lactâmico, tornando-os inativos. Os inibidores de β-lactamases são uma alternativa para o tratamento de doenças causadas por bactérias resitentes à penicilina. Neste estudo foi avaliada a capacidade de produzir inibidores de β-lactamases por 71 actinomicetos isolados de liquens da Região Amazônica e sua atividade antimicrobiana utilizando Staphylococcus aureus, resistentes à penicilina, isolados de mastite bovina. A seleção dos actinomicetos que produziram inibidores de β-lactamases foi realizada através da técnica de bloco de gelose contra Klebsiella pneumoniae ATCC 29665 e os actinomicetos selecionados foram testados contra Staphylococcus aureus resistentes. Os melhores produtores de inibidores de β-lactamases foram Streptomyces sp. DPUA 1542 e Nocardia sp DPUA 1571, os quais foram submetidos a cultivo submerso para o estudo da curva de crescimento, pH e atividade antimicrobiana. Os maiores halos de inibição, utilizando S. aureus, foram obtidos após 96 horas de cultivo tanto para Nocardia sp (13,5 e 12,0 mm) como para Streptomyces sp. (8,0 e 14,0 mm) com os testes-difusão nos discos e poços, respectivamente. Nocardia sp DPUA 1571 foi utilizado na produção de inibidores de β-lactamases por planejamento fatorial onde a influencia de três variáveis foi avaliada: concentrações da fonte de carbono (0,5, 1,0 e 1,0%), concentrações de fonte de nitrogênio (1,0, 2,5 e 4,0%) e pH (6,0, 6,5 e 7,0). A produção ocorreu em Erlenmeyers de 250mL contendo 100mL do meio de cultivo MS-2 modificado de acordo o modelo experimental, os frascos foram incubados em agitador orbital (200 rpm) a 28°C por um período de 120 horas e a cada 24 horas, alíquotas de 5mL foram retiradas e centrifugadas a 5.000 rpm por 20 minutos a 4ºC, para a determinação da atividade biológica e peso seco. A atividade biológica do líquido metabólico foi realizada através da técnica de difusão em disco e poço, nas melhores condições de cultivo (ensaio 3) com concentração da fonte de carbono de 1,0%, concentração do filtrado de soja de 1% e o pH 6,0, foram obtidos halos de inibição de até 22mm de diâmetro frente aos microrganismos teste utilizados. Os resultados permitiram concluir, que os actinomicetos isolados de liquens da Região Amazônica são uma fonte promissora de inibidores de β-lactamases, com potencial para aplicação futura na indústria farmacêutica.