Polimorfismo do gene GoLA-DRB.2 e detecção de Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster em rebanhos caprinos nos estados de Pernambuco e Paraíba, Brasil - VILAÇA, Luciana Florêncio (2017)
O programa de seleção de caprinos com aptidão leiteira tem sido, basicamente, voltado ao aumento na quantidade de leite, negligenciando fatores relacionados à resistência a doenças e à composição do leite. Este comportamento vem ocasionando o direcionamento a estudos voltados à rápida detecção de micro-organismos e à identificação de genes ou regiões cromossômicas relacionadas a doenças infectocontagiosas da glândula mamária. Diante do exposto, a presente tese teve como objetivo inicial, detectar Mycoplasma agalactiae (Ma) e Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) em amostras de leite caprino e avaliar a composição e a contagem de células somáticas provenientes de animais positivos para Ma e Mmcluster (Experimento 1). Além disso, buscou-se identificar os polimorfismos do gene Goat Lymphocyte Antigen (GoLA-DRB.2) e associar com características do leite de cabra (Experimento 2). Para realização do Experimento 1, foram colhidas 373 amostras de leite de caprinos de diferentes raças pertencentes a rebanhos localizados nos estados de Pernambuco e da Paraíba. O DNA genômico das amostras de leite foi extraído pelo método sílica/isotiocianato de guanidina, seguida da amplificação genérica e espécie-específica por reação em cadeia da polimerase. A identificação da presença ou não de produtos gênicos foi realizada através de observação direta das bandas dos produtos de PCR visualizados em gel de eletroforese. Análises de variância e testes de comparação de médias foram realizados para verificar os efeitos da positividade sobre as características de composição e contagem de células somáticas. As frequências para Ma e Mmcluster foram de 43,21% e 5,70%, nos rebanhos avaliados, respectivamente. Foram considerados fatores de risco o sistema de criação (p<0,001) e o padrão racial (p<0,001). Em todos os grupos genéticos foram detectadas amostras positivas para Ma, sendo observada maior ocorrência na raça Marota. Amostras positivas para Mmc só foram observadas em animais das raças Moxotó (18,28%), Parda Sertaneja (1,92%) e SPRD (3,12%). No estudo de associação entre a positividade e composição do leite, observou-se diferença estatística para as médias de proteína, caseína e contagem de células somáticas. A detecção de Mycoplasma em amostras de leite caprino sugere a introdução de animais infectados nos rebanhos avaliados, como também o possível contato com os agentes etiológicos em feiras e exposições. Além disso, o sistema de criação adotado na propriedade influencia a disseminação da infecção no rebanho. Para execução do Experimento 2, um total de 181 fêmeas caprinas de diferentes raças provenientes do estado de Pernambuco e da Paraíba foram selecionadas. Amostras de leite foram colhidas e submetidas à extração do DNA genômico como descrito no Experimento 1. A genotipagem dos animais para o fragmento de 285 pb do gene GoLADRB. 2 foi resultante da amplificação pela técnica de PCR-RFLP, utilizando as enzimas de restrição PstI e TaqI. A frequência alélica encontrada para a população total com a utilização da enzima PstI foi de A igual a 0,7254 e B a 0,2746, sendo as frequências dos genótipos AA, AB e BB de 0,6740, 0,0387 e 0,2873, respectivamente. As frequências alélicas obtidas a partir da digestão com a enzima TaqI foi de C = 0,8149 e D = 0,1851, sendo as frequências dos genótipos: 0,7403 (CC), 0,1492 (CD) e 0,1105 (DD), com predominância do genótipo CC em todos os padrões raciais avaliados. Os valores da Heterozigosidade observada foram menores do que os encontrado para Heterozigosidade esperada em todas as populações testadas, com rebanhos fora do equilíbrio de Hardy-Weinberg. Houve variação genética significativa entre raças, entre indivíduos da mesma raça e dentro da população. Não houve diferença significativa entre os genótipos e os padrões de haplótipos sobre os valores de gordura, proteína, lactose, sólidos totais, caseína e contagem de células somáticas. O gene GoLA-DRB.2 foi polimórfico na avaliação com as enzimas PstI e TaqI estudadas, mas não desempenhou efeitos sobre nenhumas das características de composição e contagem de células somáticas avaliadas.