Efeito do bloqueio meiótico sobre a maturação e fertilização de oócitos bovinos - SANTANA, Breno Barros de (2016)
As biotecnologias da reprodução são cada vez mais utilizadas com o objetivo de aumentar a oferta de material genético assim como preservação de germoplasma. A oferta de oócitos viáveis no estágio adequado para sua utilização é fundamental para o sucesso na produção in vitro de embriões. Uma alternativa seria evitar a retomada prematura da meiose após a remoção dos oócitos do ambiente folicular induzindo um bloqueio meiótico com o intuito de fornecer ao oócito mais tempo para que o mesmo possa sofrer modificações necessárias para suportar a fertilização e ter desenvolvimento embrionário normal. Inibidores, como o Rolipram, tem sido utilizado com esse intuito. Estes bloqueadores podem possivelmente melhorar a competência oocitária através de uma melhor maturação citoplasmática. O objetivo desse projeto foi avaliar o efeito do rolipram durante a maturação de oócitos bovinos na quantidade e qualidade de embriões produzidos in vitro. Para tanto, ovários foram coletados em abatedouro e transportados para o Laboratório de Reprodução Animal- LABRAPE da UFRPE/UAG. Os complexos cúmulos oócitos (CCOs) foram selecionados e divididos em 5 grupos: 1 Controle 0 hora: oócitos fixados e corados logo após a seleção para observarmos o status pós-coleta; Controle A: maturação por 24horas na ausência de Rolipram; Rolipram 3 tratamentos: bloqueio da maturação por 24horas em meio de maturação contendo (100, 150 e 200 μM). Após a maturação, uma parte dos oócitos dos grupos tratamentos e o grupo controle foram colocados em meio de maturação base por mais 24 horas para observar a reversão do bloqueio. Estes oócitos foram avaliados em microscópio equipado com epifluorescência. Após a maturação, o restante dos oócitos do grupo Controle e os tratamentos com Rolipram foram fecundados in vitro para avaliação das taxas de clivagem 48 horas pós fecundação e de blastocisto no D7 pós fecundação. Além disso, parte dos oócitos foram desnudados e armazenados para avaliação de expressão dos seguintes genes: Mater, BMP15 e BAX, para observação do efeito do bloqueador na expressão desses genes nos embriões. Não houve diferença estatística na expressão gênica entre grupo controle e tratamentos. Dos oócitos avaliados logo após a aspiração folicular, 79,00% encontravam-se em VG, QVGBD, ou MI, caracterizando-se como imaturos enquanto 13,40%, encontrava-se em MII e 7,60%, considerados degenerados ou não identificados. Nas diferentes concentrações de T100, T150 e T200 μM foram observadas diferenças em oócitos que atingiram a fase de MII comparando os tratamentos com o controle (P= 0,003). Quanto ao desenvolvimento embrionário houve diferenças na taxa de clivagem (P < 0,05) entre T150 e T200 quando comparados ao grupo C/24 e a taxa de blastocisto obteve diferença (P < 0,001) entre os tratamentos comparados ao grupo controle, sendo T100 μM a concentração que proporcionou menos efeitos negativos como diminuição da taxa de clivagem e blastocisto durante a pré-maturação de oócitos bovinos.