Efeito das estações do ano nas alterações celulares de oócitos e embriões da espécie ovina - BEZERRA, Filipe Queirós Gondim (2010)
Este estudo teve como objetivo determinar o efeito das estações do ano na maturação nuclear in vitro e na indução da morte celular por apoptose em oócitos ovino também como o efeito na capacidade de desenvolvimento de oócitos na produção in vitro de embriões da espécie ovina. Os ovários de ovelhas na estação seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de “slicing” dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na morfologia. Nesta etapa foram realizadas 12 repetições, onde os CCOs foram submetidos a maturação, fertilização e cultivo in vitro. A porcentagem de oócitos clivados foi determinada no dia 3 (D-3) e os oócitos que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células (D-4), mórula (D-5) e blastocisto (D-8) após a fecundação. A qualidade dos blastocistos foi avaliada com o corante DAPI e a determinação deblastômeros positivos para apoptose e fragmentação de DNA através do teste de TUNEL. Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) nas fases fertilização, D-3 e D-4. Não apresentaram diferença significativa (P > 0,05) às fases de maturação in vitro, mórula e blastocisto e na fragmentação de DNA (TUNEL). Em outra etapa 25 oócitos foram colocados em meio básico de maturação (MBM). Após a maturação, foi determinado o estádio de maturação nuclear com o corante DAPI, a atividade das enzimas Caspases do grupo II com reagente PhiPhiLux-G1D2 e fragmentação de DNA (TUNEL). Nos estádios de maturação nuclear as fases de Vesícula Germinativa, Metáfase I, Telófase I e Metáfase II não apresentaram diferença significativa (P > 0,05). Foi encontrada diferença significativa (P < 0,05) na atividade das enzimas Caspases dos oócitos maturados in vitro. A fragmentação do DNA não apresentou diferença significativa (P > 0,05). Nas condições observadas neste estudo, os resultados permitem concluir que não houve efeito da estação do ano na maturação nuclear in vitro e na apoptose de oócitos também como na capacidade de desenvolvimento de oócitos e na produção in vitro de embriões da espécie ovina.