Tolerância e persistência à enrofloxacina em Staphylococcus spp. de mastite caprina: caracterização, determinação de fatores de virulência e genômica comparativa - FRANÇA, Chirles Araújo de (2021)
O leite caprino constitui uma importante fonte de alimentação para a nutrição humana e a contaminação por bactérias provenientes de infecções intramamárias, especialmente Staphylococcus spp., representa um risco de saúde pública. Apesar da antibioticoterapia ser o método de escolha, os micro-organismos podem sobreviver, se forem resistentes, tolerantes ou persistentes. Portanto, a identificação de isolados com esses perfis pode auxiliar no controle das complicações causadas pela mastite. O objetivo deste estudo foi caracterizar isolados de Staphylococcus spp. provenientes de mastite caprina, quanto ao perfil de tolerância/persistência e fatores de virulência associados, assim como identificar possíveis fatores genéticos relacionados a persistência. A identificação taxonômica de doze isolados de Staphylococcus spp. foi realizada por meio do MALDI-TOF. Aplicou-se o TDTest para triagem da tolerância/persistência, e através da microdiluição em caldo, obteve-se as concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida (CBM) para enrofloxaxina. Curvas de morte foram realizadas utilizando 2xCIM do antimicrobiano, analisando a população bacteriana sobrevivente em função da duração mínima de morte, assim como se é dependente de dose ou tempo. Realizou-se a quantificação do biofilme, através do ensaio de aderência em microplaca. Foram sequenciados os genomas dos oitos isolados de Staphylococcus warneri antes (4) e após (4) tratamento com enrofloxacina. A relação filogenômica e plasticidade genética foram avaliadas. Adicionalmente, houve a busca por genes de resistência e virulência, assim como a presença de polimofismos. Os isolados foram identificados como Staphylococcus aureus (n=4) e S. warneri (n=8). As bactérias apresentaram CIM e CBM variando entre 0,12 e 1,95 μg / mL, concentração abaixo do breakpoint (4μg / mL). Na curva de morte, os isolados de S. aureus mostraram-se tolerantes e S. warneri foram classificados como persistentes. Verificou-se que em isolados selecionados, a persistência foi tempo dependente do tipo I. Todos os isolados foram produtores de biofilme. No sequenciamento dos isolados de S. warneri, foram determinadas as sequências completas de três genomas e cinco em formato incompleto. Os isolados foram considerados clonais e na análise pangenômica, foram encontrados 2017 genes centrais, e entre 176 a 336 genes acessórios. Contudo, não foram encontrados genes únicos. Confome as análises do COG, os genes estão envolvidos em processos de funções gerais, transcrição, replicação e reparo de recombinação. Três profagos e seis ilhas genômicas foram preditos e totalmente compartilhados por todos os genomas de S. warneri. Similarmente, sete genes de resistência e seis genes de virulência foram compartilhados. A análise de polimorfismos detectou 13 variantes. Conclui-se que a tolerância e persistência nos isolados de Staphylococcus spp. foi fator determinante na sobrevivência à enrofloxacina. A tolerância foi confirmada para S. aureus, enquanto a persistência em S. warneri. A produção de biofilme pelas espécies pode ter favorecido significativamente a tolerância ao antibiótico. As análises de genômica comparativa demonstraram similaridade entre os isolados de S. warneri persistentes, indicando o potencial de disseminação entre animais e consequentemente um risco à saúde pública. Esse estudo permitiu traçar o perfil genético de isolados de S. warneri persistentes e a presença de genes que podem estar relacionados a processos importantes para a persistência bacteriana.