Sistema em fluxo multicomutado explorando a imobilização de enzima e reagente sólido na determinação espectrofotométrica de ureia em leite - RODRIGUES, Julyana Cosme (2019)
A detecção de ureia em concentrações acima de 14 mg dL-1 admite-se a possibilidade de ocorrência de fraudes no leite, o que não é possível de ser verificado através do método oficial, pois detecta apenas nitrogênio total. Neste trabalho, é proposto um sistema de análise em fluxo multicomutado para a determinação espectrofotométrica de ureia em leite de vaca empregando a enzima urease imobilizada em celulose bacteriana e o reagente sólido, MOF (metal-organic framework) como reagente colorimétrico. Na caracterização da MOF, os resultados de FTIR evidenciaram a presença dos grupos característicos da MOF-Cu2+ contendo íons carboxilatos como ligante. O procedimento analítico proposto foi baseado na reação de hidrólise da ureia catalisada pela enzima urease, produzindo NH4+,que reage com o MOF-Cu2+ formando do tetraminocobre (II), monitorado em 450nm. O sistema proposto é composto de duas minibombas solenoides, uma válvula solenoide de três vias, uma coluna confeccionada em polimetil-metacrilato (PMMA) composta por duas partes iguais, separadas por discos de sílica, onde ocorre a reação enzimática e, posteriormente, a reação colorimétrica e um espectrofotômetro. O controle do sistema foi desenvolvido empregando a programação de linguagem C, por meio de uma placa de arduino® UNO. Após a otimização do sistema, obteve-se respostas lineares entre 1,0 e 50,0 mg dL-1 de ureia (R = 0,997, n = 11) com limites de detecção e quantificação estimados em 0,082 mg dL-1 e 0,272 mg dL-1 respectivamente, frequência analítica de 7 determinações por hora, consumo de solução de amostra de 0,8 mL, totalizando 1,4 mL de resíduo final, respectivamente. Estudos de potenciais interferentes demonstraram a seletividade do método proposto. Posteriormente, amostras de leite UHT, leite em pó e composto lácteo foram adquiridas nos mercados locais da região metropolitana do Recife e analisadas empregando o sistema proposto. Testes de adição e recuperação foram realizados para validação do procedimento, obtendo-se variação entre 90 e 103 %, demonstrando a eficiência do método proposto na detecção de ureia em amostras de leite. Comparado os resultados obtidos pelo método proposto e pelo método de referência (KIT Ureia CE) e, aplicando o teste F (precisão) e o teste t(exatidão), os resultados não apresentaram diferença significativa ao nível 95% de confiança. O sistema proposto apresentou-se robusto com uma estrutura de fácil implementação e operação viabilizando sua aplicação em análises de rotina.