Detecção de mutações no gene CFTR em pacientes com suspeitas de fibrose cística - Serrano, Thaiane Rispoli (2016)
A fibrose cística (FC) é uma doença genética autossômica recessiva de alta incidência em populações euro-descendentes (1: 2500 nascimentos) causada por mutações no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Aproximadamente 2.000 mutações foram descritas, sendo a mais prevalente F508del. Estas mutações causam disfunções na proteína CFTR que regula as passagens de cloro e de sódio através da membrana celular, conduzindo a diferentes graus de manifestações clínicas. Atualmente, no Rio Grande do Sul (RS), apenas o estudo molecular para a mutação F508del é realizada. Portanto, é necessário a busca por métodos moleculares que possibilitem a detecção de outras mutações. O objetivo principal desse estudo foi implementar uma metodologia molecular para a detecção de 11 mutações (R1162X, G85E, R117H, 2789 + 5G> A, G542X, R334W, W1282X, R553X, 1717-1G>A, 3120-1G>A e G551D) no gene CFTR, utilizando a extensão de base única (SNaPshot), e aplicá-la em uma população com suspeita de FC (teste do suor alterado ou limítrofe ou com a mutação F508del detectada). O material genético foi extraído a partir de sangue total de 34 pacientes com suspeita de FC através da técnica de salting-out. As frequências alélicas das mutações encontradas por SNaPshot foram: G542X (5,9%), R334W (1,5%), W1282X (2,9%), 3120-1G>A (2,9%). Os genótipos encontrados, levando em consideração o complemento de informações de F508del foram: 9 (26,5%) F508del/desconhecido, 2 (5,9%) G542X / F508del, 1 (2,9%) 3120-1G>A / F508del, 1 (2,9%) R334W / F508del, 1 (2,9%) G542X / G542X, 1 (2,9%) 3120-1G>A /desconhecido, 1 (2,9%) W1282X/F508del e 1 (2,9%) W1282X/desconhecido. Adicionalmente, foi realizada a detecção da mutação F508del em pacientes com suspeita de FC que vieram a óbito durante a triagem, além da padronização de uma técnica para extração de DNA a partir de sangue seco em papel filtro S&S 903. Noventa e três pacientes com IRT maior do que 70 ng/mL foram estudados. A frequência de 2,15% destes pacientes apresentou a mutação F508del em heterozigose. Através do estudo desenvolvido foi possível padronizar um método de detecção molecular de 11 mutações no gene CFTR que, uma vez implantado na rotina do Serviço de Referência de Triagem Neonatal, permitirá um melhor direcionamento do tratamento, aconselhamento genético, prognóstico e qualidade de vida dos pacientes.