Comparação de diferentes soluções para preservação do DNA de amostras citológicas bucais - Nunes, Júlia Silveira (2020)
Introdução: O processo da carcinogênese é desencadeado pelo acúmulo de mutações genéticas. Por isso, o uso de testes que identifiquem essas alterações, pode ser um valioso preditor de risco para o câncer de boca. O DNA isolado de células bucais esfoliadas pode ser empregado com sucesso para tal fim. Para isso, a utilização de soluções de preservação de DNA formuladas em laboratório, a um baixo custo e que garantam a viabilidade do material coletado pode ser um fator contribuinte para emprego destes testes em grande escala populacional. Objetivo: Avaliar a preservação do DNA de células bucais esfoliadas mantidas em soluções de preservação formuladas em laboratório em comparação com uma solução comercial e uma solução tampão. Materiais e Métodos: Foram manipuladas soluções de preservação de DNA: Nucleic Acid Preservation Buffer (NAP), Dimethyl sulphoxide disodium-EDTA-satured NaCl (DESS) e Tris-EDTA-NaCl-Tween20 buffer (TENT) e uma solução tampão phosphate buffered saline (PBS). Utilizou-se também a solução comercial Liqui-PREP (LP). As células esfoliadas da mucosa jugal foram divididas em cinco grupos: PBS, LP, NAP, DESS e TENT. As amostras foram mantidas em temperatura ambiente ou a 4°C durante os tempos: 0h, 24h, 72h, 7 dias, 30 dias, 90 dias, 180 dias e 360 dias. O DNA foi extraído através do QIAamp DNA mini Kit. A quantificação e pureza do DNA amostral foram mensuradas através do espectrofotômetro de microvolume NanoDrop e análise fluorométrica QuBit. Por último, o DNA foi analisado quanto a sua integridade pela eletroforese em gel de agarose e amplificação através das reação em cadeia da polimerase (PCR). Resultados: a quantidade de DNA obtida flutuou ao longo do tempo, mas em geral o PBS forneceu maiores quantidades, seguido das soluções DESS e TENT. Melhores níveis de pureza foram obtidos pela solução PBS. A solução DESS resultou em mais amostras com DNA íntegro, e o número de amostras com integridade aceitável foi maior no período até 30 dias. A amplificação por PCR para o primer IFNA foi possível para amostras armazenadas por até 7 dias. Conclusão: a solução DESS é a mais adequada para a obtenção de DNA a partir de amostras citológicas bucais e estas podem ser armazenadas em 4°C ou temperatura ambiente por até 7 dias