Comparação entre métodos de segregação espermática pós-descongelamento para a avaliação do status de capacitação acrossomal em sêmen bovino congelado - Benvenutti, Verônica Rafaela (2024)
A capacitação espermática é definida como uma série de eventos que o espermatozoide sofre para adquirir a habilidade de fecundar, porém, este processo deve ocorrer no momento e local corretos, caso contrário, as células poderão não sobreviver até o momento da fecundação. O objetivo deste estudo foi identificar um método de segregação espermática com baixa influência na indução da capacitação espermática de sêmen bovino congelado para adequada avaliação do status acrossomal da amostra. Foram testados três métodos de segregação: lavagem espermática, gradiente de mini-Percoll® e swim up, aplicados a doses de sêmen congelado de três touros. Foram utilizados diferentes tempos e velocidades de centrifugação para o mini-Percoll® e para a lavagem, e diferentes meios para a lavagem (Sperm-TALP sem albumina, e PBS). Após a segregação, foram avaliados parâmetros de motilidade e vigor de motilidade (M/V), viabilidade por coloração de azul de tripano e Giemsa (ATG) e pelo teste hiposmótico (HOST), hiperativação, aglutinação e avaliação do status do acrossoma por coloração com clortetraciclina (CTC). As amostras de cada touro responderam de forma distinta aos métodos de segregação. Em geral, a menor proporção de células capacitadas (CA) foi observada após a segregação pela lavagem e pelo mini-Percoll®. Pós-segregação, as amostras foram divididas em grupo controle (Sperm-TALP sem heparina) e grupo indução (Fert-TALP com 10 UI/mL de heparina) para avaliar o comportamento das células à presença de heparina após 0, 15 e 120 min de incubação. As amostras segregadas por mini-Percoll® e por lavagem incubadas com heparina apresentaram aumento na proporção de células CA e com reação acrossomal (RA), não havendo uma resposta imediata nas amostras segregadas pelo swim up. Houve perda de qualidade e viabilidade em função do tempo, aumentando a proporção de células CA. Não houve influência dos meios da lavagem no status do acrossoma, porém, as amostras submetidas à menor força g se apresentaram mais estáveis à indução da capacitação. Houve uma importante variabilidade individual entre os touros, com um touro sendo mais resistente à indução da capacitação pela segregação, outro apresentando uma resistência intermediária para capacitação, mas alta para a RA, e o terceiro sendo mais sensível e susceptível à ocorrência da capacitação. Entretanto, os métodos de menor perturbação ao status acrossomal entre os touros foram a lavagem e o mini-Percoll®. Por fim, observou-se que quanto maior a proporção de células espermáticas CA, menor a viabilidade in vitro ao longo do tempo, e vice-versa, o que pode ser relevante para a fertilidade a campo, quando utilizado sêmen bovino congelado para a inseminação artificial (IA).