Avaliação funcional do transporte de glutamato Na⁺₋ dependente em cérebro de peixe-zebra adulto - Horn, Joel Felipe (2023)
O glutamato é o principal neurotransmissor excitatório em cérebro de mamíferos e está envolvido em inúmeros eventos fisiológicos e patológicos. Um dos papéis mais importantes dos astrócitos é a remoção deste neurotransmissor através de transportadores específicos para glutamato (os EAATs), prevenindo a excitotoxicidade. A descoberta de novos fármacos capazes de exercer efeitos modulatórios sobre a atividade e/ou expressão dos EAATs ainda é emergente, visando condições nas quais os EAATs desempenham papel regulador chave no processo de patogênese (como déficit de atenção e hiperatividade, depressão, epilepsia, Alzheimer). Neste contexto, o peixe-zebra emergiu como um novo modelo animal para descoberta de novos fármacos, bem como modelo para doenças neurodegenerativas, complementando os estudos em roedores principalmente pela praticidade de tiragens em larga escala. Apesar dos avanços no estudo da sinalização glutamatérgica em peixe-zebra, a avaliação da funcionalidade dos transportadores ainda carece de literatura científica. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o perfil da captação de glutamato e a funcionalidade dos EAATs nas diferentes estruturas cerebrais de peixe-zebra. Foram obtidas as regiões encefálicas por dissecação (telencéfalo, teto óptico e cerebelo), que foram incubadas com substrato (0,1, 1, 10, 100 e 1000 μM), ou ouabaína 0,1 μM, ou PDC (0,01, 0,1, 1, 10, 50 e 100 μM), ou TBOA (0,01, 0,1, 1, 10 e 100 μM). O telencéfalo apresentou um valor de Vmáx de 2,324 nmol de glu/min.mg de proteína e um Km aparente de 539,7 μM. O teto óptico apresentou um valor de Vmáx de 2,210 nmol de glu/min.mg de proteína e um Km aparente de 740,5 μM, enquanto o cerebelo apresentou um valor de Vmáx de 2,241 nmol de glu/min.mg de proteína e o valor de Km aparente de 763,4 μM. A inibição da captação de glutamato na presença de 0,1 μM de ouabaína foi de 86% em telencéfalo, 89% em teto óptico e 91% em cerebelo. O inibidor PDC apresentou um IC50 de 5,287 μM para telencéfalo, 18,99 μM para teto óptico e 15,30 μM para cerebelo. Já o TBOA apresentou um IC50 de 4,53 μM para telencéfalo, 16,06 μM para teto óptico e 0,1 μM para cerebelo. Conclui-se que a captação sódio dependente apresenta particularidades de acordo com a região avaliada e que telencéfalo e cerebelo são regiões que podem ser estudadas com enfoque mais translacional por mimetizarem a diferença de potência dos inibidores observada em roedores.