Avaliação da participação da ecto-5’-nucleotidase/CD73 na progressão de gliomas e mecanismos de resistência à quimioterapia padrão - Manica, Fabiana de Mattos (2021)
Os gliomas são o tipo tumoral que mais acomete o SNC. O glioblastoma (GBM) é um glioma de grau IV, originado de astrócitos ou de células precursoras de astrócitos. O GBM é um tumor bastante agressivo, que apresenta uma elevada taxa de proliferação e um comportamento altamente invasivo. Muitos estudos têm demonstrado que o GBM apresenta um aumento da atividade e expressão da ecto-5’-nucleotidase/CD73 (e5NT/CD73), comportamento oposto às células análogas normais, os astrócitos, e que essa enzima auxilia na progressão desses tumores. Além da função enzimática, foi mostrado que a e5NT/CD73 também exerce importante papel na interação célula-célula e célula-matriz. As células C6 de glioma de rato são descritas como um ótimo modelo in vitro para estudo de gliomas e em altas passagens são utilizadas como modelo de astrócito. Estudos do nosso laboratório demonstraram que cérebro de ratos inoculados com células C6 de alta passagem, desenvolvem tumores menores, em relação aos animais em que foram implantadas células C6 de baixa passagem. Com isso, no presente estudo caracterizamos o papel desempenhado pela e5NT/CD73 no crescimento de GBM in vitro e in vivo. Foi observado uma significativa redução da hidrólise do AMP pelas células C6 de baixa passagem. Esse resultado foi confirmado por citometria de fluxo, onde demonstrou-se que essa célula expressa menos e5NT/CD73 e que o perfil de expressão das NTPDases é bastante semelhante nas duas linhagens. Em relação a capacidade proliferativa das células, verificamos por marcação para Ki67, que as linhagens não diferem em relação à proliferação. Entretanto quando tratadas com AMP (substrato da e5NT/CD73), apenas as células C6 de baixa passagem modificam o perfil de crescimento. Assim, demonstrando a importância da presença de e5NT/CD73 e consequente formação de adenosina para a progressão dos gliomas. Verificamos também alguns parâmetros de malignidade que envolvem a e5NT/CD73, já que é também uma proteína que auxilia na adesão e migração. Observamos que as células C6 de baixa passagem possuem uma capacidade adesiva menor e consequentemente, uma capacidade maior de migração comparada a C6 de alta passagem. Além disso, verificamos que quando tratamos com APCP (inibidor da e5NT/CD73), as células C6 de baixa passagem tem seu potencial de migração reduzido, demonstrando que a migração é dependente, pelo menos em parte, da atividade da e5NT/CD73. Esses resultados foram confirmados pela análise de formação de colônia, onde verificamos que as células C6 de baixa passagem formam mais e maiores colônias que as células C6 de alta passagem, mesmo apresentando uma capacidade proliferativa muito semelhante, além disso, o APCP foi capaz de reduzir a formação de colônias. Adicionalmente, como já observado anteriormente, células C6 de alta passagem desenvolvem tumores menores quando implantadas no estriado de ratos. Em contrapartida as células C6 de baixa passagem desenvolvem tumores característicos de GBM. Esses dados em conjunto demonstram que a presença da e5NT/CD73 é fundamental para a progressão do GBM e que a mesma representa um alvo interessante na corrida por tratamentos mais eficazes contra esse tumor. Finalmente, na segunda parte da presente Dissertação não foi possível chegar a uma conclusão clara entre o envolvimento da e5NT/CD73 e a resistência celular à temozolamida. Outros estudos são necessários para avaliarmos uma possível relação.