Análise da infecção in vitro e in vivo pelo Zika vírus no desenvolvimento de doenças cardiovasculares - Silva, Fernanda Marques da (2022)
O Zika vírus (ZIKV) é conhecido por sua relação com complicações neurológicas, entretanto, estudos recentes também indicam que o ZIKV pode estar relacionado com o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Diante do aumento do número de relatos de casos de pacientes com complicações cardíacas após a infecção por ZIKV, se faz necessário estudos experimentais que busquem investigar esta associação. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da infecção pelo ZIKV, in vitro, in vivo e in silico no desenvolvimento de doenças cardiovasculares. No estudo in vitro células H9c2 e A7r5 foram infectadas com o ZIKV de origem brasileira, utilizando multiplicidade de infecção (MOI) de 1; 0,1 e 0,01. As células infectadas foram observadas diariamente em microscópio óptico para verificação de efeito citopático (ECP). A cada 24h pós-infecção, durante um período de 4 dias, os cultivos infectados foram congelados, descongelados e aliquotados para posterior análise de genoma viral por qPCR e titulação viral. Para análise da viabilidade celular foi realizado o teste de atividade da lactato desidrogenase (LDH) e para estresse oxidativo foi analisada a proteína carbonil e redução de NBT. No experimento in vivo, camundongos fêmeas FVB/N (n=8), com idade de 60 dias, foram inoculados com 1x10⁵ UFP de ZIKV via intravenosa. Após 4 dias de infecção, foi realizada coleta de sangue e tecido cardíaco para análise de troponina T, atividade enzimática de fatores de coagulação, aminopeptidases e análise de estresse oxidativo. Foi realizada análise estatística univariada através do teste t e ANOVA. Ainda, correlacionamos genes listados na Zika Virus Infection Database (ZIKAVID) aos genes ligados ao estresse oxidativo da Mouse Genome Database (MGD) a fim de verificar associação entre doenças cardíacas, estresse oxidativo e o ZIKV. As linhagens celulares apresentaram ECP característico de infecção viral e o RNA genômico foi detectado em todos os períodos analisados. A linhagem H9c2 produziu uma quantidade de vírus significativamente superior à A7r5 e analisando o estresse oxidativo após infecção, verifica-se que os níveis médios de conteúdo carbonil foram significativamente maiores nas linhagens celulares infectadas. Já in vivo, nas fêmeas infectadas houve um aumento significativo de troponina T quando comparado ao grupo controle. Ainda, observou-se um aumento significativo da atividade de enzimas fibrinolíticas e níveis elevados das aminopeptidases. Também, os resultados demonstraram alto índice de estresse oxidativo no tecido cardíaco de camundongos infectados. Conclui-se que além da suscetibilidade celular ao ZIKV, animais imunocompetentes infectados apresentam marcador de injúria celular elevado com ativação de enzimas pró-coagulantes e uma regulação negativa da fibrinólise, o que provavelmente indica um estado pró- trombótico nesses animais, evidenciando uma associação entre o vírus e complicações cardíacas.