Uso de DNA barcode para identificação de espécies de palmito como ferramenta para a genética forense - Todeschini, Cristina Corrêa (2019)
O palmito pode ser obtido de diferentes espécies de palmeiras. Compõe-se basicamente das folhas não desenvolvidas imediatamente acima do meristema apical, responsável pelo desenvolvimento da palmeira. Atualmente, o Brasil é responsável por 95% da produção mundial de palmito e também é um grande consumidor. A maior parte da produção de palmito vem das palmeiras do gênero Euterpe. Devido à ampla distribuição natural e alta densidade populacional, a espécie Euterpe edulis Mart. e Euterpe oleracea Mart. foram exploradas para este fim em um nível predatório. Essa exploração contribui para a degradação do meio ambiente e tornou-se um fator preocupante para a preservação, principalmente, de E. edulis, uma vez que não há rebrotação, pois apresenta um único caule. O presente estudo é uma iniciativa para reforçar a necessidade de um programa de regulação baseado na identificação por DNA barcode de espécies comercializadas irregularmente como palmito em conserva nos mercados do Sul do Brasil. Os DNA barcode geralmente se referem a sequências curtas de DNA, que podem ser usadas para identificar espécies com rapidez e precisão. Além da identificação das espécies, os DNA barcode também podem melhorar ou complementar a taxonomia tradicional baseada em caracteres morfológicos. Um barcode ideal deve obedecer a três critérios: universalidade, facilidade de amplificação e sequenciamento; qualidade da sequência; e poder discriminatório. Neste estudo, o objetivo geral foi distinguir quatro espécies utilizadas como palmito (E. edulis, E. oleraceae, Bactris gasipaes e Archontophoenix cunninghamiana) tanto in natura quanto em palmito em conserva. Como recomendado pelo CBOL Plant Working Group, foram avaliados os marcadores individualmente e também combinados. Foram utilizados três marcadores de cloroplasto, candidatos a DNA barcode: rps16-trnk, trnL-trnF e rpl32-trnL, e o marcador nuclear: ITS2, para comparar as quatro espécies de acordo com o sucesso da amplificação, poder de discriminação e divergência inter e intraespecífica.Os resultados mostraram que o marcador rpl32-trnL pode ser usado individualmente como um barcode, bem como marcadores concatenados para distinguir essas espécies de plantas, enquanto que para animais somente o COI (cytocrome oxydase I) é necessário. A alta qualidade e pureza do DNA isolado de produtos processados são fatores essenciais para a identificação de espécies e podem afetar a análise. Neste estudo, dois métodos foram principalmente testados para a extração de DNA: Dnaesymericon Food Kit e o método CTAB com modificações; após, as etapas de amplificação e sequenciamento foram realizadas. Além disso, os principais fatores que influenciam o sucesso da amplificação por PCR são o tamanho do fragmento amplificado e o status de processamento do alimento, que pode envolver superaquecimento dos tecidos, compostos químicos, tempo de armazenamento e contaminação, causando degradação do DNA. Fragmentos curtos e produtos não processados resultam em taxas de sucesso mais altas. No que diz respeito ao marcador ITS2, este pôde ser amplificado para todas as espécies processadas deste estudo, mas sequenciado apenas para E. edulis, E. oleraceae e Bactris gasipaes. 6 Para o marcador trnL-trnF, apenas as amostras processadas de E. oleraceae foram amplificadas e sequenciadas com sucesso, e somente para este marcador o método baseado na árvore de NJ pôde ser realizado com sucesso. A implementação de tais programas regulatórios usando tecnologias inovadoras, como os métodos de identificação baseados em DNA, pode desencorajar a substituição deliberada no mercado de palmito e levar a uma redução significativa na rotulagem errada do produto.