Análise de miRNAs como biomarcadores para câncer de próstata - Wlach, Mônica (2023)
O câncer de próstata (CaP) é o segundo tipo de câncer mais incidente na população masculina mundial. O rastreamento de CaP consiste na determinação sérica do antígeno prostático específico (PSA) e no exame de toque retal (DRE), e o diagnóstico padrão-ouro é a biópsia de próstata. A determinação dos níveis de PSA não é uma abordagem com alta especificidade. Para evitar o sobrediagnóstico e sobretratamento de pacientes com CaP, é necessário validar novos biomarcadores mais sensíveis e específicos para a doença. Nesse aspecto, os miRNAs têm sido amplamente estudados como possíveis biomarcadores para diversos tipos de câncer, incluindo o CaP. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão de miRNAs em tecido prostático e sangue em amostras de pacientes com CaP e pacientes com hiperplasia prostática benigna (HPB). Foram coletadas amostras de tecido prostático e sangue de 66 pacientes submetidos à cirurgia de próstata, sendo 33 diagnosticados com CaP e 33 com HPB. A extração de RNA foi realizada de forma automatizada com o kit comercial MagMAX™ mirVana™ Total RNA Isolation Kit (Thermo Fisher Scientific, EUA) e, nesta etapa, foi adicionado uma solução de RNA exógeno (cel-miR-39) para servir como controle de todas as etapas dos experimentos. A conversão do RNA e síntese de cDNA foi feita com o TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit (Thermo Fisher Scientific, EUA). As qPCRs foram realizadas no termociclador StepOne Plus (Thermo Fisher Scientific, EUA), empregando-se os reagentes TaqMan Fast Advanced Master Mix e TaqMan Advanced miRNAs Assays (Thermo Fisher Scientific, EUA). As expressões relativas dos miRNAs foram calculadas utilizando o método 2-ΔΔCq. Para esse cálculo, foi utilizado como controle um miRNA endógeno e expresso de forma estável entre os grupos analisados. Além disso, foi preparada uma amostra calibradora para cada tipo de tecido biológico, contendo um pool de RNAs de pacientes de ambos os grupos analisados. Para investigar o poder discriminatório dos miRNAs entre os grupos, foram geradas curvas ROC (receiver-operating characteristic) e calculadas as áreas sob as curvas (areas under the curves – AUC). Para avaliar o poder discriminatório da combinação dos alvos, foram realizadas análises de regressão logística. No plasma, apenas o miR-375-3p demonstrou maior expressão no grupo CaP em comparação ao grupo HPB. No tecido prostático, os três miRNAs analisados estavam significativamente mais expressos no CaP do que na HPB. Apesar da ampla utilização do PSA sérico no rastreamento e monitoramento do CaP, na amostragem deste estudo, a utilização do miRNA plasmático 375-3p, e dos miRNAs teciduais 375-3p, 21-5p e 200b-3p, de forma individual ou combinada, permitiram uma melhor diferenciação entre os pacientes com CaP e os pacientes com HPB do que a utilização única do PSA sérico. A partir dos resultados deste trabalho, podemos sugerir o miR-375-3p como um possível biomarcador não-invasivo para o diagnóstico e manejo do câncer de próstata.