Caracterização de proteínas de superfície em protoescólices de Echinococcus granulosus s.s. e Echinococcus ortleppi - Barros, Guilherme Figueiredo (2016)
A hidatidose cística é uma zoonose causada pela forma larval patogênica (metacestódeo) do parasito cestódeo Echinococcus granulosus no hospedeiro intermediário (ovinos ou bovinos e, acidentalmente o homem). O metacestódeo é um cisto hidático, que abriga as formas pré-adultas do parasito, os protoescólices, que, ao serem ingeridos pelo hospedeiro definitivo (canídeos) diferenciam-se em vermes adultos. Se liberados no interior do hospedeiro intermediário, por rompimento do cisto, rediferenciam-se em cistos secundários. Pouco se sabe sobre os mecanismos moleculares de desenvolvimento envolvidos nessa plasticidade dos protoescólices. A fim de identificar e caracterizar proteínas de protoescólices que possam ter uma participação direta na interação com o hospedeiro, foram analisadas frações ricas em proteínas de superfície. Para isso, foram coletados protoescólices das espécies E. granulosus sensu stricto (s.s.) e E. ortleppi (ambas endêmicas no Rio Grande do Sul, Brasil), que pertencem ao complexo E. granulosus sensu latu (s.l.). Foram utilizadas duas abordagens experimentais: uma análise in silico do genoma de E. granulosus s.s., que resultou na predição de que ~21% das proteínas totais codificadas como de superfície; e uma análise proteômica comparativa de frações enriquecidas com proteínas de superfície de protoescólices de E. granulosus s.s. e E. ortleppi. Nas análises proteômicas por espectrometria de massas (LC-ESI-MS/MS) foram identificadas ao todo 50 diferentes proteínas (30 exclusivas de E. granulosus s.s., 7 exclusivas de E. ortleppi e 13 compartilhadas). De todas as 50 proteínas identificadas por LC-ESI-MS/MS, 18 também foram encontradas nas análises in silico. As proteínas preditas in silico como de superfície, ou identificadas por LC- ESI-MS/MS, foram submetidas à análise quanto a sua expressão em protoescólices (de acordo com a análise transcricional realizada por RNA-seq a partir do genoma de E. granulosus s.s.), encontrando níveis transcricionais para todas estas proteínas. Através da classificação funcional, foi possível encontrar um perfil semelhante entre as proteínas preditas como in silico e as proteínas identificadas por LC-ESI-MS/MS, como muitas relacionadas a componentes estruturais, ligadas a membrana e envolvida em diversos processos celulares, principalmente relacionados a transportadores e ligação a íons. Estas análises permitiram encontrar proteínas de Echinococcus granulosus s.l. alvos para futuros estudos funcionais, para o desenvolvimento de drogas anti-helmínticas ou de interesse como potenciais antígenos para diagnóstico ou vacinação.