Protocolo para remoção do crioprotetor do sêmen criopreservado de Rhamdia quelen - Pérez Atehortúa, Maritza (2021)
A criopreservação oferece vários benefícios, entre estes o armazenamento de espermatozoides a longo prazo. No entanto, a falta de padronização ou a redução da qualidade espermática após o congelamento-descongelamento são desafios que ainda precisam ser resolvidos. O uso de tecnologias de reprodução assistida, como a centrifugação, tem sido relatada como uma ferramenta que permite separar a melhor porção de espermatozoides do sêmen criopreservado. O objetivo da pesquisa foi desenvolver um método de centrifugação para sêmen criopreservado de Rhamdia quelen e sua influência sobre a funcionalidade e capacidade de fecundação dos espermatozoides separados por gradiente de densidades AllGrad® 90%. Para isto foram realizados dois estudos. O primeiro estudo teve como objetivo a padronização de um método de centrifugação por gradiente de densidades para a separação do sêmen criopreservado de R. quelen a través do gradiente AllGrad® 90%. Seguidamente o método foi validado por meio de análises de qualidade (concentração, motilidade e morfologia espermática). Ao final deste estudo, a centrifugação de 1000 x g por 10 min, permitiu obter em média 8,19 x 106 espermatozoides normais/mL (22,25 ± 4,64%). Este valor representa um aumento de 9,25% dos espermatozoides normais em comparação ao sêmen criopreservado não centrifugado (P = 0,0013). Esse resultado deu lugar a um segundo estudo, cujo objetivo foi validar a eficiência da técnica de centrifugação por gradiente de densidades sobre a funcionalidade espermática e capacidade de fertilização. Foram comparados três tratamentos: i) controle (sêmen descongelado não centrifugado), ii) a centrifugação diferencial ou peletização e, iii) centrifugação por gradiente de densidades com AllGrad® 90%. A centrifugação diferencial resultou em melhores taxas de motilidade (42,58 ± 6,05%). Tanto a centrifugação diferencial quanto por gradiente de densidades resultou em melhores índices de atividade mitocondrial (1,58 ± 0,79 e 2,02 ± 1,88 AU/100 milhões sptz, respectivamente), taxa de fertilização (76,68 ± 15,22% e 69,85 ± 17,85%, respectivamente) e de eclosão (54,62 ± 17,39% e 50,87 ± 20,59%, respectivamente). Portanto, os métodos de centrifugação aplicados pela primeira vez no sêmen criopreservado de R. quelen, mostraram ser eficientes para obter uma melhor fração de espermatozoides.