Uma estratégia funcional para a caracterização de OsbHLH35 e OsGRF11 no desenvolvimento de arroz - Ortolan, Francieli (2018)
O arroz (Oryza sativa L.) é extremamente versátil, é planta modelo das monocotiledôneas, seu grão é base alimentar de milhões de pessoas ao redor do mundo, e é amplamente cultivado, agregando valor econômico e social à cultura. As proteínas do tipo bHLH (basic helix-loop-helix) são membros de uma das maiores famílias de fatores de transcrição em plantas e participam da regulação de uma grande variedade de processos. Para entender a função de um membro desta família, foi realizado um ensaio de mono-híbrido em levedura, que permitiu identificar três membros da família GRF (Growth Regulating Factor), OsGRF3, OsGRF4 e OsGRF11, como reguladores transcricionais do gene OsbHLH35. A fim de fornecer informações adicionais sobre a função de OsbHLH35 e para confirmar a regulação de OsGRF11 sobre OsbHLH35 in vivo, plantas de arroz superexpressando os genes separadamente foram previamente obtidas através de transformação de calos embriogênicos de arroz via Agrobacterium tumefaciens. Quatro linhagens de OsbHLH35 e sete de OsGRF11 foram obtidas e analisadas molecularmente através da análise da expressão relativa dos genes OsbHLH35 e OsGRF11 que confirmou a superexpressão dos genes de interesse. A análise fenotípica das plantas superexpressando OsbHLH35 mostrou que essas plantas produziam significativamente menor número de sementes que as plantas não transformadas, além de apresentarem fenótipo de pálea e lema abertas, flores não fecundadas e poucas sementes maduras. Ao realizar uma análise detalhada da flor, foram observadas anteras com aspecto curvo. Para abordar em quais tecidos OsbHLH35 é expresso, um estudo do promotor foi realizado em plantas de arroz expressando o gene repórter da β-glucuronidase sob o controle do promotor de OsbHLH35. Através dessa abordagem observou-se a expressão de OsbHLH35 na antera, nos primórdios florais, na pálea e lema, e no ovário. A análise da expressão relativa de OsGRF11 e OsbHLH35 ao longo do desenvolvimento da panícula em plantas do tipo selvagem mostrou que OsGRF11 é altamente expresso em todos os estágios de desenvolvimento analisados, enquanto a expressão de OsbHLH35 é baixa nas mesmas condições. Entender como OsbHLH35 está envolvida no desenvolvimento da antera, quais são os genes regulados por esse fator de transcrição, e como é sua relação com outras bHLHs permitirá elucidar onde este gene está inserido no processo de desenvolvimento floral de arroz.