Desenvolvimento de um método rápido para detecção de Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC) em cromatografia liquida [sic] acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) - Lovison, Otávio von Ameln (2019)
Enterobacterales resistentes aos carbapenêmicos (ERC) foram reconhecidas como uma ameaça urgente à saúde global que causam a maioria das infecções de difícil tratamento em estabelecimentos de saúde e estão associadas a elevada mortalidade. ERCs produtoras de Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), principalmente Klebsiella pneumoniae, são mundialmente disseminadas e responsáveis por um grande número de surtos. Métodos rápidos de diagnóstico proporcionam grandes benefícios clínicos e epidemiológicos. Recentemente, um método de detecção direta de KPC baseado em cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) foi desenvolvido. O objetivo deste trabalho foi padronizar e validar este método, com adaptações adequadas às nossas especificações e disponibilidade de equipamentos. Testamos o nosso método contra uma ampla variedade de isolados, incluindo produtores de outras carbapenemases. Para fase de validação foram selecionados 111 isolados (49 KPC-positivos e 62 KPC-negativos) provenientes de um estudo de vigilância para o monitoramento de Enterobacterales com susceptibilidade reduzida aos carbapenêmicos. Os resultados foram avaliados por um operador experiente que desconhecia a caracterização prévia dos isolados. O operador classificou corretamente 47 dos 49 isolados KPC-positivos. Todos os isolados KPC-negativos (n=62) foram corretamente classificados. O método apresentou uma sensibilidade de 96,07% e uma especificidade de 100%. A presença de outras carbapenemases não interferiu nos resultados. O peptídeo APIVLAVYTR se apresentou negativo em 19 dos 49 isolados KPC-positivos, enquanto GFLAAAVLAR apresentou apenas um resultado negativo. LTLGSALAAPQR e LALEGLGVNGQ foram detectados em todos extratos proteicos. Em conclusão, nossos resultados demonstram que os peptídeos marcadores de KPC foram robustamente detectados pelo método em LC-MS/MS, que apresentou elevada sensibilidade e especificidade e pode ser utilizado como um método confirmatório para detecção deste mecanismo de resistência em Enterobacterales.