Extração e caracterização de colágeno de pele de Tilápia (Oreochromis Niloticus) : avaliação do seu potencial na formulação de hidrogéis para medicina regenerativa - Justino, Marco Antônio (2021)
Neste estudo, colágeno tipo I foi extraído de pele do peixe tilápia (Oreochromis niloticus), com base em sua solubilidade em ácido acético (HAc). Para extração, a pele foi previamente tratada em solução de cloreto de sódio (NaCl) e hidróxido de sódio (NaOH). Foi observado que as peles tratadas em NaOH apresentaram maior solubilidade em HAc e resultaram em uma solução mais viscosa. O colágeno solúvel em HAc foi então purificado por salting-out utilizando NaCl e sulfato de amônio ((NH4)2SO4) à 2 mol L-1 e 0,9 mol L-1. Houve precipitação do colágeno I em ambas as concentrações, no entanto, em concentrações salinas mais elevadas houve precipitação de outras proteínas, o que foi possível ser comprovado pelo perfil de SDS-PAGE das amostras. O colágeno extraído foi caracterizado por análises de DSC e TGA a fim de determinar a temperatura de desnaturação e temperatura máxima de degradação, respectivamente. A caracterização química e estrutural foi determinada por FTIR-ATR e Dicroísmo Circular. Posteriormente, o colágeno extraído foi empregado na formulação de hidrogéis utilizando poli(etileno glicol) (PEG) e quitosana (Q). Para isso, o PEG foi primeiramente funcionalizado com grupos reticuláveis através da reação com anidrido metracrílico. A funcionalização pode ser confirmada pela análise de ressonância magnética nuclear de próton (RMN 1H). Foram preparados hidrogéis contendo PEG/Q e hidrogéis contendo PEG/Q-Col em duas concentrações diferentes de colágeno, 2 mg mL-1 e 6 mg mL-1. Os hidrogéis foram reticulatos utilizando persulfato de potássio (PSP) como iniciador e N,N,N’,N’-tetraetilenodiamina (TEMED) como ativador, em duas quantidades diferentes, 10 mmol e 15 mmol, resultando em 6 diferentes sistemas de hidrogéis. A presença do colágeno pode ser comprovada através dos espectros FTIR-ATR, sendo a sua inserção ao hidrogel resulta em uma redução do grau de intumescimento. Os ensaios biológicos realizados mostraram que os hidrogéis elaborados não apresentaram toxicidade à célula e podem servir como substrato para adesão celular.