Investigação de grandes rearranjos e mecanismo de doença nas genodermatoses mais comuns: Neurofibromatose tipo 1 e Esclerose tuberosa - Reis, Larissa Brussa (2021)
Introdução: As doenças monogênicas neurofibromatose tipo 1 (NF1) e esclerose Tuberosa (ET) são consideradas síndromes genéticas raras com malignidade associada. Trata-se das duas genodermatoses mais frequentes, que apresentam como sintomas em comum as lesões cutâneas, ocorrência de tumores no Sistema Nervoso Central, deficiência cognitiva e/ou de desenvolvimento. Com uma gama variada de alterações genéticas envolvidas e sintomas em diferentes graus de comprometimento, caracterizar essas doenças, bem como investigar as alterações genéticas encontradas em subgrupos clínicos é um desafio. Objetivos: O objetivo dos trabalhos reunidos nesta tese foi caracterizar, do ponto de vista evolutivo, clínico e molecular, pacientes com NF1 e ET diagnosticados com rearranjos gênicos, realizar caracterização molecular adicional por análise de transcritos em pacientes com diagnóstico clínico de ET, bem como explorar o mecanismo de autofagia envolvido nesta doença. Resultados: Através de uma abordagem evolutiva foram avaliadas microdeleções encontradas em pacientes com NF1 envolvendo quatorze genes co-deletados. Destes, dez genes mostraram seleção purificadora e quatro genes mostraram seleção positiva, sendo um deles, RNF135, apresentando também seleção positiva de aminoácidos específicos, reforçando sua importância e contribuição para a doença e possível correlação da sua deleção com o fenótipo mais grave desses pacientes. Adicionalmente, foi apresentado relato de caso de um paciente com ET e rearranjo gênico, descrevendo manifestações clínicas não habitualmente relacionadas com a doença e sugerindo, através de revisão de todas as evidências existentes, a inclusão destas manifestações no fenótipo da síndrome. Como resultados preliminares, apresentamos o recrutamento de pacientes com ET e variantes de significado incerto ou ausência de variante patogênica na região codificadora dos genes TSC1 e TSC2, bem como o desenho de primers que serão utilizados para a investigação de exon-skipping no RNA mensageiro desses pacientes. Por fim, uma revisão bibliográfica apresenta o paradoxo da via de autofagia e potenciais estratégias terapêuticas envolvidas com essa via para pacientes acometidos com ET e resultados preliminares apresentam o estabelecimento de fibroblastos de paciente ET com mutação em TSC2 e de fibroblastos de indivíduo sem ET, a fim de realizar avaliação do impacto de moduladores de autofagia no fluxo autofágico e nos mecanismos de mitofagia, apoptose e necrose celular.