Otimização da regeneração in vitro de Urochloa spp. via embriogênese somática - Takamori, Luciana Midori (2014)
O estabelecimento de uma metodologia eficiente para regeneração in vitro de Urochloa spp. via embriogênese somática é essencial para trabalhos de manipulação genética e, para dar suporte ao melhoramento do capim braquiária. O objetivo deste trabalho foi avaliar diferentes concentrações de reguladores de crescimento na indução de calos, embriões somáticos e na regeneração de plantas de Urochloa spp., utilizando sementes maduras como explante inicial. Inicialmente, foram testados quatro tratamentos contendo 2,4-D ou picloram, nas concentrações de 1, 2, 4 e 8 mg/L usando a cultivar Marandu (1cultivar x 2 reguladores x 4 concentrações x 12 repetições). Posteriormente, as mesmas concentrações de picloram foram testadas para as cultivares Xaraés e Piatã de U. brizantha e para as espécies de U. decumbens cv. Basilisk, U. humidicola cv. Llanero e U. ruziziensis cv. Ruziziensis (6 cultivares x 1 regulador x 4 concentrações x 12 repetições). Os experimentos foram conduzidos em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições por tratamento, sendo que cada repetição foi composta por uma placa contendo 10 sementes cada. Os experimentos foram repetidos três vezes. As sementes foram desinfestadas em NaOCl a 5% contendo três gotas de Tween 20, lavadas cinco vezes em água destilada esterilizada e inoculadas em meio MS contendo as diferentes concentrações dos reguladores de crescimento. Os experimentos foram mantidos em câmara de crescimento a 25 ºC ± 2 ºC, na ausência de luz, sendo sub-cultivados a cada 14 dias até o surgimento de calos embriogênicos. Estes calos foram transferidos para o meio MS sem adição de fitorreguladores por 14 dias, em luz indireta e, em seguida, transferidos para o meio MS/2 contendo 2 mg/L de BA, sob luz direta, com fotoperíodo de 16 horas para regeneração de plantas. Foram analisados o número de sementes que produziram calos primários, número de calos que produziram brotos e número de plantas regeneradas. Os diferentes tipos de calos produzidos foram avaliados citoquimicamente por meio da dupla coloração com Carmim acético e azul de Evans para certificar a competência embriogênica. Para a U. brizantha cv Marandu não houve diferença significativa entre os tratamentos para o percentual médio de sementes que produziram calos primários variando de 58,5% a 69,2%. Calos embriogênicos induzidos com o regulador de crescimento picloram certificaram o maior percentual de formação de brotos diferindo significativamente daqueles induzidos sob 2,4-D. O maior número de plantas regeneradas foi observado na concentração de 1 mg/L de picloram para os genótipos U. decumbens cv. Basilisk, U. brizantha cv. Marandu e Xaraés e não apresentando diferença significativa entre eles. Plantas verdes e morfologicamente normais foram regeneradas e aclimatizadas, abrindo a possibilidade do uso deste protocolo para obtenção de plantas transgênicas em Urochloa spp.