Avaliação do uso de SOF (Fluido De Oviduto Sintético) e CLA (Ácido Linoleico Conjugado) na expressão gênica de genes relacionados ao metabolismo lipídico e maturação oocitária em COCs (Complexos Cumulus-Oócito) bovinos - Mendes, Adriano Felipe (2019)
Visando o desenvolvimento de um meio capaz de suportar todas as etapas da produção in vitro de embriões bovinos, o objetivo desse estudo foi investigar se a utilização de fluido de oviduto sintético (SOF) acrescido ou não de ácido linoleico conjugado (CLA) durante a maturação in vitro de oócitos bovinos altera a abundância de transcritos ligados ao metabolismo lipídico e maturação oocitária. Os complexos cumulus-oócito (COCs) foram aspirados de ovários obtidos em abatedouro e maturados em quatro grupos: M199 (Medium 199), M199+CLA (M199 com 100 µM de CLA), SOF e SOF+CLA (SOF com 100 µM de CLA). A abundância relativa de RNAm de oócitos e células do cumulus foi avaliada após a maturação. As amostras de RNA total foram tratadas com DNAse antes de serem submetidas ao protocolo de transcrição reversa. Foram realizadas análises de RT-qPCR dos genes FADS2 (fatty acid desaturase 2), SCD1 (stearoyl-CoA desaturase 1), SREBP1 (sterol regulatory element binding transcription factor 1), GREM1 (gremlin 1), AREG (amphiregulin) e COX2 (cyclooxygenase 2). O Gene PPIA (peptidylprolyl isomerase A) foi utilizado como referência e o método ∆∆Ct com correção de eficiência foi usado para calcular os valores de expressão relativa (genes alvo/PPIA) para cada gene alvo usando uma amostra de controle como calibrador. As amostras foram distribuídas em delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x2, totalizando 4 tratamentos, com 5 repetições. Os dados foram submetidos a análise de variância e em caso de diferença significativa (p<0,05) as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de significância. COCs maturados com SOF apresentam maior abundância relativa de RNAm dos marcadores qualidade GREM1 (p=0,0065) e COX2 (p=0,0040) em oócitos e GREM1 (p=0,0004) em células do cumulus. O meio SOF também proporciona maior abundância relativa de FADS2 (p=0,0001), essencial para o metabolismo lipídico, em oócitos. Adicionalmente, oócitos maturados com SOF apresentam menor abundância relativa de SCD1 sem influência da adição de CLA. Em contrapartida, a abundância relativa de SCD1 é reduzida no meio M199 com a utilização de CLA. Concluímos que o meio SOF proporciona maior abundância de marcadores de qualidade em oócitos independentemente da adição de CLA.