Síntese, caracterização, atividade biológica e sinérgica de peptídeos antimicrobianos análogos às bacteriocinas de Leuconostoc mesenteroides ta33a - Vaz, Aline Buda dos Santos (2018)
As leucocinas são peptídeos antimicrobianos, sintetizados no ribossomo de bactérias láticas do gênero Leuconostoc spp que são capazes de inibir microrganismos patogênicos e indicadores higiênico sanitários. Este trabalho tem como objetivo central, testar a atividade antimicrobiana de peptídeos derivados leucocinas em diferentes espécies de microrganismos de interesse na área de contaminação alimentar. Para atingir os objetivos, foram projetados peptídeos com base na estrutura secundária de Leucocinas A- e B-TA33a, os quais foram posteriormente sintetizados pelo método de síntese em fase sólida. As purificações dos peptídeos foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência e a caracterização das moléculas por meio de espectrometria de massas. O análogo nativo LeuB, apresentou maior porcentagem de inibição de crescimento de Salmonella sorovar Typhimurium (71%) e Escherichia coli O157:H7 (69%). O análogo LeuA1 apresentou maior inibição contra as bactérias Listeria monocytogenes (79%) e Staphylococcus aureus (96%) e o análogo LeuAB2 para Pseudomonas aeruginosa (91%). Neste trabalho, evidencia-se ação bacteriostática para todos os peptídeos e ação parcialmente sinérgica entre os peptídeos LeuB e LeuA1, pelo ensaio de Cherckerboard (ΣCIF ≤ 0,75) contra Listeria monocytogenes. No ensaio de inibição enzimática o peptídeo LeuB, foi capaz de inibir a atividade da enzima DNA Girase e Topoisomerase IV a partir de 100 μg/mL e o LeuA1 inibiu a atividade de relaxamento da Topoisomerase IV em concentrações a partir de 100 μg.mL-1. Os peptídeos LeuB e LeuA1, atingiram 100% de vazamento de CF a concentração de 6,25 μg/ml, no primeiro minuto e para o peptídeo LeuAB2 aos 8 minutos houve uma porcentagem de vazamento em torno de 80%. Os peptídeos não apresentaram inibição da atividade da enzima topoisomerase I humana. No entanto, em concentrações de ≥ 200 μg/mL, foram capazes de inibir a enzima humana topoisomerase IIα. Mesmo assim, o percentual de hemólise dos peptídeos em hemácias humanas foi de no máximo 2%, resultados que indicam uma reduzida ação citotóxica em células eucarióticas. O análogo LeuA1 apresentou propriedade antioxidante de 406 μMol em equivalentes de Trolox o que corresponde a 24% de capacidade redutora, podendo inibir a deterioração oxidativa nos alimentos. Os espectros de dicroísmo demonstraram flexibilidade conformacional predominando estrutura de α-hélice em TFE 60% e SDS, para os peptídeos LeuB, LeuA1 e LeuAB2.