Investigação da funcionalidade de haplótipos no gene Interleucina 4 - Anovazzi, Giovana [UNESP] (2016)
A Doença Periodontal (DP) tem caráter multifatorial, com influência de fatores como a presença de microrganismos periodontopatogênicos, reação do sistema imune, suscetibilidade genética do hospedeiro, hábito de fumar, stress e presença de doenças sistêmicas. O tecido periodontal inflamado produz várias citocinas, dentre elas a interleucina 4 (IL-4). Estudos realizados por este grupo identificaram que indivíduos carregando os polimorfismos -590(T/C), +33(T/C) e VNTR(I/D) no gene IL4 formando o haplótipo TCI/CCI são 5 vezes mais suscetíveis à DP (Odds Ratio ajustado= 5,3; 95% Intervalo Confiança = 2,2 -12,9), enquanto o haplótipo TTD/CTI conferiu proteção contra o desenvolvimento da DP, Odds Ratio ajustado= 0,18 (95% Intervalo Confiança = 0,04 - 0,88). Assim, para verificar a funcionalidade dos haplótipos no gene IL4, o objetivo deste estudo foi investigar possíveis diferenças na resposta imune frente a estímulos inflamatórios e de bactérias periodontopatogênicas em células coletadas do sangue de pacientes que carregam tais diferentes haplótipos. A funcionalidade dos referidos haplótipos no gene IL4 foi também investigada por meio da regulação da expressão do gene repórter presente em plasmídeos recombinantes construídos artificialmente (constructos). Foram coletados sangue periférico de 5 pacientes de cada haplótipo e estimulados com mediadores inflamatórios e bactérias periodontopatogênicas para se avaliar a expressão gênica (mRNA, RT-qPCR), proteínas secretadas (Multiplex) e proteínas intracelulares caracterizando o perfil fenotípico celular (Citometria de fluxo). Constructos contendo cada haplótipo foram transfectados em células JM e suafuncionalidade foi avaliada por meio da expressão do gene repórter GFP utilizando citometria de fluxo. Independente do tipo de estímulo à que as culturas celulares foram submetidas, foram detectados níveis mais elevados de mRNA e da proteína IL-4 no grupo do haplótipo CTI/TTD, que também apresentaram níveis mais elevados de outras citocinas anti-inflamatórias. Culturas celulares com o haplótipo TCI/CCI mostraram resultado oposto; isto é, níveis mais elevados de citocinas pró-inflamatórias. Observou-se também que o constructo TCI apresentou os maiores níveis de expressão de GFP em comparação ao constructo contendo apenas o polimorfismo na região promotora. Conclui-se que os haplótipos formados por polimorfismos no gene IL4 influenciaram os níveis de expressão genica e de proteínas.