Análise bioquímica dos produtos de excreção/secreção de larvas de Dermatobia hominis - Brant, Milena Palmeira Reis Caldeira [UNESP] (2004)
O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de caracterizar os produtos de excreção/secreção (PE/S) de larvas de Dermatobia hominis, especialmente, no que se refere à atividade proteolítica desses produtos. Os PE/S foram obtidos de larvas de primeiro estágio (L1) cultivadas em laboratório e de larvas de segundo (L2) e terceiro (L3) estágios colhidas de bovinos parasitados. O perfil das proteínas foi obtido pela eletroforese dos PE/S em gel de poliacrilamida contendo sódio dodecil sulfato (SDS-PAGE) e a atividade proteolítica foi investigada utilizando gelatina, azocaseína e N-a-benzoil-arginina-nitroanilida (BAPNA) como substratos. Para caracterização das proteases foram realizados ensaios utilizando estes mesmos substratos, nos quais as amostras foram tratadas com os inibidores: PMSF, TPCK, TLCK, DCI, E-64, EDTA, Elastatinal, Leupeptina, Fenantrolina e Antipaína. Nos PE/S de L1 foram detectadas exclusivamente proteases com peso molecular aparente acima de 168 kDa, cuja inibição revelou pertencerem aos grupos das metalo-proteases e serina-proteases. Os zimogramas dos PE/S de L2 e L3 em géis copolimerizados com gelatina revelaram uma ampla faixa de atividade proteolítica, na qual estavam presentes proteases de alto, médio e baixo pesos moleculares aparentes. Nos ensaios realizados com inibidores de proteases, utilizando os três substratos, as proteases presentes em L2 e L3 foram identificadas como pertencentes ao grupo das serina-proteases, sendo em L3, predominantemente, do tipo tripsina. As alterações nos padrões de proteólise e nas características bioquímicas das proteases presentes nos três estágios larvais discuti- se à atividade das larvas em cada fase do seu desenvolvimento.