Influência do cobre no padrão de expressão de genes envolvidos na interação de Paracoccidioides brasiliensis com a matriz extracelular - Oliveira, Haroldo Cesar de [UNESP] (2010)
Paracoccidioides brasiliensis (Pb) é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, micose sistêmica de grande importância no Brasil, país que possui a maior concentração de áreas endêmicas para essa doença no mundo. Uma das estratégias possivelmente utilizadas pelo patógeno seria a expressão de genes envolvendo adaptação às condições do hospedeiro, que pode também estar relacionadas à captação de micronutrientes. A matriz extracelular (MEC) desempenha um papel importante na regulação da adesão celular, diferenciação, migração e proliferação das células. Este estudo propõe uma análise de transcritos e de proteínas expressas em condições de depleção de cobre, na presença de quatro matrizes extracelulares – laminina, fibronectina e colágeno I e IV, mimetizando as condições de infecção por P. brasiliensis por meio das técnicas de RDA (Representational Difference Analysis) e eletroforese bidimensional. Para isso, o isolado Pb01 foi cultivado por 3 horas no meio quimicamente definido (MVM), depletado de cobre (Cu) e a seguir colocado em contato com os quatro diferentes componentes da MEC e a adesão foi avaliada por citometria de fluxo. Um aumento significativo (p ≤ 0,05) na adesão frente a todos os componentes da MEC foi observado quando o fungo foi cultivado sem Cu. Então, o RNA e os extratos protéicos foram obtidos de Pb sem Cu e Pb sem Cu em contato com os diferentes componentes da MEC. Ensaios de RDA foram realizados para demonstrar os genes envolvidos neste processo. Duas hibridizações foram realizadas nas proporções de 1:10 e 1:100 de tester e driver, respectivamente, com um excesso de driver para remover as seqüências comuns em ambas condições. Os produtos diferencialmente expressos foram amplificados, resultando em padrões distintos que foram seqüenciados...