Purificação e caracterização bioquímica da CGTase produzida por Paenibacillus campinasensis H69-3 - Sanches, Raisa Déli de Oliveira [UNESP] (2018)
Uma ciclomaltodextrina glucanotransferase (E.C. 2.4.1.19, CGTase) produzida pelo microrganismo Paenibacillus campinasensis linhagem H69-3, foi obtida por fermentação submersa a 45 °C, e a CGTase purificada por cromatografia de afinidade bioespecífica em resina Sepharose 6B ativada com β-CD. A enzima foi purificada até 23 vezes, obtendo um rendimento de 11,0%, e a atividade específica de 32,6 U mg-1 ao final da etapa de purificação. A massa molecular da enzima purificada foi estimada em 72 kDa por eletroforese desnaturante em gel de poliacrilamida na presença de dodecil-sulfato de sódio. O pH ótimo para a atividade enzimática foi de 6,5 e a enzima foi estável na faixa de pH de 6,5 a 8,0. A temperatura ótima foi de 65 °C em pH 6,5, e foi térmicamente estável até 55 °C na ausência de substrato durante 1 h de incubação e estável até 65 °C na presença de Ca2+ 5 mmol L-1. A atividade enzimática aumentou na presença de Ba2+, Mg2+, Ca2+, Ni2+, K+, Zn2+ e foi inibida na presenca dos íons metálicos Cu2+, Hg2+, Ag+, Li2+, Al3+ e NH42+ e por β‑, γ‑CD, DMSO, Triton, SDS e NaN3. Utilizando maltodextrina como substrato a CGTase apresentou 11,0±0,5 µmol min·mg e 0,30 ± 0,07 mg mL‑1, Vmáx e Km, respectivamente. Avaliaram-se os parâmetros termodinâmicos da CGTase, que demonstrou mais de 11 horas a 65 ºC como tempo de meia vida, e elevada resistência estrutural à desnaturação térmica quando avaliados os resultados de entropia, energia de ativação e entalpia.