Transcriptoma do fungo de origem marinha Peniophora sp. CBMAI 1063: análise dos genes de lacase, clonagem e expressão heteróloga - Otero, Igor Vinicius Ramos [UNESP] (2016)
As lacases pertencem ao grupo das multicobre oxidases e o interesse biotecnológico por essas enzimas se deve ao fato delas catalisarem reações envolvendo diferentes compostos fenólicos e amínicos. A utilização diversificada dessas enzimas na indústria estimula a busca por lacases capazes de se adaptar aos diferentes processos industriais visando encontrar a relação de ótimo custo-benefício. O basidiomiceto de origem marinha Peniophora sp. CBMAI 1063, já demonstrou capacidade de secretar quantidades significativas de lacase sob condições otimizadas (salinas) para produção da enzima. As lacases desse organismo podem apresentar características diferenciadas devido a origem marinha do basidiomiceto. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo a obtenção das sequências de lacase do fungo Peniophora sp. CBMAI 1063 através da análise do transcriptoma, afim de realizar a caracterização in silico dessas sequências, análises filogenéticas, clonagem e expressão heteróloga. Foram obtidas 13 isoformas de lacase correspondente a 8 genes putativos para a enzima, das 13 isoformas, 11 foram referentes a lacases extracelulares e 2 intracelulares. Todas as isoformas apresentaram-se ricas em conteúdo GC (> 52 %) sendo os aminoácidos Valina, Leucina, Serina, Ácido aspártico e Treonina os mais representativos na composição polipeptídica. A massa das lacases variou entre 53,5 e 64,6 kDa. Nove isoformas apresentaram o aminoácido Leucina e 4 isoformas apresentaram o aminoácido Fenilalanina na posição variável ligado ao cobre tipo 1 que possui atividade regulatória sobre a enzima. Nenhuma das isoformas apresentou similaridade maior a 57% em relação à outras sequências de lacases depositadas no NCBI e, portanto, demonstraram ser potencialmente diferentes das lacases originárias de outros basidiomicetos marinhos e terrestres. A clonagem de um fragmento codificante de lacase do fungo Peniophora sp. CBMAI 1063 possibilitou a montagem de sistemas de expressão baseado em 3 linhagens diferentes de Escherichia coli. Os resultados de expressão da enzima recombinante não foram conclusivos, contudo, o presente trabalho traz contribuições significativas ao estudo das lacases produzidas pelo fungo basidiomiceto de origem marinha Peniophora sp. CBMAI 1063, demonstrando a capacidade desse organismo de produzir diferentes lacases com potencial para aplicação biotecnológica.