Caracterização e transplante de células germinativas primordiais em peixes neotropicais - Coelho, Geovanna Carla Zacheo (2021)
Atividades antrópicas aumentam o número de espécies de peixes ameaçadas, e, portanto, esforços na conservação são necessários para atenuar tais efeitos. O estabelecimento de bancos genéticos e procedimentos de reconstituição são então essenciais para a manutenção da ictiofauna, incluindo o transplante de células germinativas primordiais (PGCs), para posterior reconstituição de espécies ameaçadas de extinção, por meio da geração de quimeras germinativas e propagação substituta. Apesar do potencial mencionado acima, a produção de quimeras germinativas em espécies de peixes nativas ainda não foi estabelecida. O objetivo deste trabalho foi produzir quimeras germinativas em espécies nativas por meio do transplante de PGCs em receptores estéreis em fase de blástula. A marcação e rastreabilidade da rota de migração de PGCs in vivo em Prochilodus lineatus e Piaractus mesopotamicus foi realizada com sucesso, utilizando microinjeção de mRNA sintetizado in vitro, constituído pela sequência codificante do gene repórter GFP fusionada com a região reguladora de tradução 3’ UTR do gene nanos1 de Danio rerio. As PGCs de A. altiparanae e P. lineatus cultivadas em solução salina ou meio suplementado foi obtida e transplantada em receptores triploides de (A. altiparanae) e/ou híbridos triploides (A. altiparanae X A. fasciatus). As PGCs de A. altiparanae cultivadas em meio suplementado tiveram migração direcionada para a região da crista gonadal em 4,5% dos receptores triplóides e em 19,3% dos híbridos triplóides, enquanto as PGCs cultivadas em solução salina apresentaram apenas migração ectópica. No transplante de PGCs de P. lineatus, apenas migração ectópica foi observada nos receptores híbridos triploides. A análise do nível de expressão de genes específicos de PGCs foi realizada em diferentes tecidos, além da comparação da expressão entre PGCs isoladas em diferentes meios de cultura. Os resultados indicaram que a maior parte da expressão gênica é detectada apenas em gônadas adultas. A expressão gênica em PGCs isoladas demonstra maior nível de expressão em dnd1, ddx4 e dazl em PGCs cultivadas em meio de cultura suplementado em comparação com PGCs de solução salina, indicando que o meio de cultura ajuda a manter as características dessas células. As expressões de nanos e cxcr4b foram diminuídas em PGCs do meio de cultura suplementado em relação à solução salina. Esses genes são marcadores de PGCs e estão diretamente ligados a diferenciação e migração dessas células, alterações nos níveis de expressão podem levar a perda da identidade celular e migração ectópica. O presente estudo traz novas abordagens sobre o transplante de células germinativas primordiais em espécies nativas de peixes, incluindo procedimentos de micromanipulação e transplante de PGCs em espécies da região neotropical. Essas informações são importantes para a construção de bancos genéticos e a reconstituição de espécies ameaçadas.