Estudo proteômico das células espermáticas de touros - Scott, Caroline [UNESP] (2017)
O estudo proteômico é utilizado como ferramenta na reprodução animal como auxílio para compreesão da fisiologia das células. Neste sentido esta técnica é empregada em espermatozoides na tentativa de elucidar os processos biológicos e assim determinar os mecanismos moleculares envolvidos na separação do sexo. Assim, o objetivo deste estudo foi descrever as proteínas das células espermáticas de bovinos em diferentes aspectos. No estudo 1, investigou-se a influência do tampão de extração, associado ou não ao método mecânico (flash-frozen), e da concentração celular sobre a quantidade de proteínas extraídas de espermatozoides de bovinos. Foram utilizados como tampões TRIS contendo Nonidet P-40 (NP), RIPA modificado (RP) e uréia/tiuréia/CHAPS (UT), e as concentrações de 2, 4, 6, 8 e 10 x 106 espermatozoides/mL em grupos submetidos ou não ao flash-frozen. As concentrações de proteína total foram quantificadas e gel de eletroforese SDS-1D foi confeccionado. O tratamento UT recuperou maior concentração de proteínas, porém no RP as proteínas apresentaram melhor resolução no gel de eletroforese. A concentração protéica aumentou de acordo com a concentração de células no NP e UT. A influência do flash-frozen variou de acordo com o tratamento. No estudo 2, o objetivo foi traçar o perfil proteico de células espermáticas sexadas (X e Y) de bovinos. Foram utilizadas amostras comerciais de espermatozoides sexados X (n = 6) e Y (n = 6). As proteínas foram solubilizadas, submetidas a espectromia de massas, análise SWATH. Foram identificadas 459 proteínas comuns aos grupos, 10 variaram a abundância relativa (p < 0,05) De acordo com os resultados obtidos nos 2 estudos conclui-se que a concentração de proteína recuperada em uma amostra varia de acordo com o tratamento e concentração celular. Não foram identificadas proteinas exclusivas presentes nos espermatozoides sexados para X ou Y, entretanto deve-se ressaltar que há uma contaminação de 10% com espermatozoides portadores dos cromossomos opostos, ainda assim, este estudo poderá ser utilizado como embasamento científico para novas pesquisas em busca de marcadores sexo-específicos.