Atividade antifúngica de metabólitos produzidos por Streptococcus mutans sobre Candida albicans. - Fugisaki, Luciana Ruano de Oliveira [UNESP] (2019)
A formação de biofilmes e produção de hifas por Candida albicans são importantes fatores de virulência, principalmente, para a aderência à mucosa e invasão tecidual. A busca por metabólitos secundários produzidos por S. mutans é de suma importância, pois poderá fornecer novas estratégias terapêuticas no combate às infecções por Candida, possibilitando o desenvolvimento de medicamentos capazes de inibir os mecanismos de patogenicidade das espécies desse gênero. Desse modo, o objetivo desse estudo foi obter o extrato bruto e frações a partir do sobrenadante da cultura de 4 h de S. mutans (UA159) e avaliar seus efeitos sobre os mecanismos de patogenicidade de C. albicans (ATCC18804) por meio de estudos in vitro. Após o cultivo de S. mutans, o extrato bruto foi obtido via partição líquido-líquido com acetato de etila (3x) e posteriormente fracionado em coluna de sílica derivatizada C-18 eluída com gradiente MeOH:H2O, fornecendo cinco frações (SM-F1, SM-F2, SM-F3, SM-F4 e SM-F5). A identificação das substâncias contidas no extrato bruto e frações foi realizada utilizando cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG-EM), sendo encontradas as seguintes substâncias: ácido octanóico e uridina no extrato bruto, ácido propanóico, (3R)-3-Methyl-1,4-bis(trimethylsilyl)piperazine-2,5-dione, pirimidina, gulose e oleamida na SM-F1 e ácido nicotínico e triptofano na SM-F2. O extrato bruto e as frações foram submetidos aos ensaios de bioatividade sobre a formação de hifas de C. albicans e analisados por microscopia óptica e microscopia eletrônica de varredura (MEV). O extrato bruto e a fração SM-F2, que resultou em maior inibição das hifas, foram investigados na expressão de genes de C. albicans envolvidos no mecanismo de filamentação (CPH1, EFG1, HWP1, UME6 e YWP1) por PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR). Além disso, o potencial de inibição do extrato bruto, frações SM-F1 e SM-F2 foi avaliado sobre a formação de biofilmes de C. albicans, analisados pela quantificação de células viáveis (UFC/mL) e MEV. Os resultados demonstraram inibição significativa na formação de hifas de C. albicans pelo extrato bruto e principalmente, pela SM-F2, com alterações significativas na expressão de todos os genes analisados. O extrato bruto e SM-F2 regularam negativamente a expressão dos genes CPH1, EFG1, HWP1 e UME6, em contrapartida, regularam positivamente a expressão do gene YWP1, envolvido no mecanismo de dispersão das leveduras. Nas análises de UFC/mL, os resultados demonstraram redução nas contagens de C. albicans nos biofilmes formados quando em contato com o extrato bruto, frações SM-F1 e SM-F2 em todas as concentrações testadas, sendo que o extrato bruto reduziu totalmente as células de C. albicans na concentração 15 mg/mL. Os resultados do nosso estudo demonstraram que o extrato bruto e frações de S. mutans apresentaram efeitos inibitórios sobre importantes mecanismos de virulência de C. albicans, fornecendo evidências que S. mutans produz substâncias com ação antifúngica, tornando-o promissor na busca de novos compostos antimicrobianos para prevenção e tratamento das candidoses humanas.