Estabelecimento de um modelo celular pró-esteatótico e as particularidades mecanísticas de atuação do microRNA-1914-5p no metabolismo lipídico - Barbosa, Thaís Porto (2020)
As doenças hepáticas estão entre as principais causas de morte no mundo todo, afetando aproximadamente 20% da população. A esteatose hepática é uma condição caracterizada pelo acúmulo de gordura nos hepatócitos e, embora seja uma condição reversível, pode progredir para quadro de esteatohepatite e carcinoma hepatocelular. A falta de tratamentos específicos para a esteatose é um problema atual, e a caracterização de novas moléculas poderá ajudar no desenvolvimento de terapias. Diversos estudos apontam um papel decisivo de microRNAs (miRNAs) no desenvolvimento de patologias hepáticas. Os miRNA são pequenas moléculas que estão envolvidas na regulação de genes importantes no metabolismo lipídico. Mais especificamente, o miR-1914-5p está intimamente relacionado com a biossíntese de ácidos graxos em células hepáticas estreladas, e buscar entender sua atuação funcional no quadro pró-esteatótico celular é o objetivo central dessa proposta. Para isto, um modelo celular pró-esteatótico foi estabelecido no presente trabalho, utilizando-se linhagens celulares hepáticas, tais como LX-2 e HepG2. Ensaios bioquímicos para mensuração de lipídeos intracelulares e níveis de β-oxidação foram realizados. Em células cocultivadas, onde houve um aumento dos níveis endógenos do miR-1914-5p, observou-se um aumento no conteúdo lipídico intracelular, sugerindo um efeito acentuado deste miRNA na produção e acúmulo de lipídeos. Sob outra perspectiva, células cocultivadas onde o miR-1914-5p foi inibido, houve diminuição nos níveis de lipídeos totais e glicose intracelulares, inferindo que este miRNA estaria diminuindo espécies lipídicas que são alteradas no quadro pró-esteatótico. Análises bioquímicas e de expressão gênica foram realizadas em células LX-2. Em células onde há aumento endógeno do miR-1914-5p, houve aumento nos níveis de triglicerídeos e colesterol, além da modulação dos níveis de expressão de diversos genes correlatos à síntese, armazenamento e hidrólise de lipídeos, sugerindo que as células contendo esta condição estariam tentando encontrar uma homeostase lipídica ao liberar AGs para oxidação. Por outro lado, células onde o miR-1914-5p foi inibido, houve diminuição nos níveis de colesterol intracelulares, além deste miRNA ter mostrado interagir com sítios putativos de genes correlatos à síntese de colesterol. A partir dos resultados, a inibição do miR-1914-5p pareceu ter um efeito mais intenso na síntese de lipídeos, uma vez que genes relacionados à via oxidativa não foram modulados. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que o efeito do miR-1914-5p parece variar em linhagens cultivadas isoladamente, tendo a confirmação de que a potencial ação deste miRNA é aparentemente fortalecida quando este é inserido em linhagens cocultivadas.