Uso da técnica phage display para identificação e avaliação de peptídeos capazes de reduzir a taxa de infecção em macrófagos - Verga, Juliane Buzzon Meneghesso [UNESP] (2023)
Diante da alta incidência e gravidade das leishmanioses, especialmente a leishmaniose visceral (LV), e reconhecendo as limitações dos métodos convencionais de controle e tratamento, nosso projeto de pesquisa buscou contribuir para o combate e prevenção dessas doenças. Tivemos como principal objetivo deste projeto a identificação de peptídeos capazes de reduzir a taxa de infecção de células THP-1 diferenciadas a macrófagos pelas espécies Leishmania amazonensis, Leishmania mexicana e Leishmania infantum. A identificação de tais peptídeos se deu via aplicação da técnica de phage display como um meio para selecionar fagos recombinantes que expressassem peptídeos com alta afinidade à superfície das diferentes espécies de Leishmania. O processo de seleção de sequências peptídicas de interesse se deu com base em três critérios i) análise da frequência de sequências identificadas por meio de sequenciamento, ii) análise qualitativa da interação fago-Leishmania via ensaios de fluorescência, e iii) ensaios de inibição da taxa de infecção em macrófagos utilizando fagos recombinantes. O fago selecionado a partir de ensaios de phage display frente à L. infantum, A9, reduziu a taxa de infecção de macrófagos em 51.5% e 53.6% para L. infantum e L. amazonensis, respectivamente. Já o fago, H1, selecionado via interação com L. amazonensis, apresentou reduções significativas da taxa de infecção, 47%, apenas da própria espécie. Partindo da sequência peptídica expressa por tais fagos, foram sintetizados os peptídeos La1 e Li1, derivados dos fagos H1 e A9, respectivamente. Análises dos ensaios de inibição de infecção com peptídeos sintéticos mostraram que o peptídeo La1 inibe em 45% a taxa de infecção de macrófagos por L. amazonensis, enquanto o peptídeo, Li1, reduziu a taxa de infecção de macrófagos tanto para L. infantum (42%) quanto para L. mexicana (39%). Estudos in vivo, utilizando o modelo murino BALB/c infectado com L. infantum, mostraram uma redução da carga parasitária em 84%, demonstrando o potencial terapêutico do peptídeo Li1. A descoberta de dois peptídeos, um capaz de inibir a infecção por duas espécies e um espécie-específico, abre a possibilidade de uma continuidade deste trabalho com capacidade de impacto em ciência básica. Futuros trabalhos, podem utilizar das sequências peptídicas e resultados apresentados nessa tese para identificar proteínas de superfície responsáveis pela interação parasita-hospedeiro das diferentes espécies. Além disso, a significativa redução da infecção in vivo também mostra a capacidade deste trabalho em contribuir com futuras estratégias de combate às leishmanioses.