Cymbopogon nardus (L.) Rendle (citronela): prospecção química-biológica do óleo essencial com destaque no estudo de biofilme e controle da candidíase vulvovaginal - Toledo, Luciani Gaspar de [UNESP] (2020)
A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma infecção fúngica oportunista que ocasiona relevante problema à saúde da mulher, visto os desagradáveis sintomas desta afecção, somada às dificuldades terapêuticas dos fármacos da prática clínica e ao surgimento de cepas resistentes. Neste sentido, as plantas medicinais associadas a alternativas que melhorem o potencial antifúngico, como o emprego da nanotecnologia, despontam como uma importante fonte no controle e erradicação de infecções fúngicas. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do óleo essencial (OE) de Cymbopogon nardus (L.) Rendle, em forma livre e incorporado em microemulsão lipídica (ME+OE) frente cepas ATCC e clínicas de C. albicans, C. glabrata e C. krusei. O OE foi obtido por hidrodestilação. A análise química do OE foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrofotômetro de massas (CG-EM). As microemulsões lípidicas (ME) foram desenvolvidas e um diagrama de fases foi construído. A ME e ME+OE foram caracterizados por dispersão de luz dinâmica, análise do potencial zeta, microscopia de luz polarizada, ensaios reológicos, força mucoadesiva e microscopia eletrônica de transmissão (MET). A potencialidade antifúngica do OE e ME+OE foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM) por microdiluição, ensaio de interação sorbitol e ergosterol. O ensaio de inibição da formação de hifas de C. albicans em presença de probiótico e patógeno vaginal foi realizado por meio de sistema transwells®. Além disso, superfícies revestidas com OE, ME+OE e limpa foram caracterizadas por ângulo de contato (bolha cativa). O efeito do OE e ME+OE sobre processo de adesão em biofilme foi avaliado em câmara de fluxo em placas paralelas e força de adesão entres superfície revestidas e C. albicans por microscopia de força atômica (MFA). Adicionalmente, foi avaliado a ação do OE e ME+OE sobre biofilmes maduros monotípicos e heterotípicos (C. albicans + Lactobacillus acidophilus). A capacidade de toxicidade do OE e ME+OE foi analisada sobre linhagem celular humana HaCat e em modelo alternativo de Artemia salina. A avaliação da atividade terapêutica do OE e ME+OE em ensaio in vivo de CVV foi executada em camundongos fêmeas da linhagem C57BL/6. A análise química do OE apresentou como componentes químicos majoritários: citronelal, geranial, geraniol, citronelol, geranial e neral. A caracterização físico-química mostrou que ME e ME+OE apresentam tamanho de partículas e homogeneidade adequadas, potencial zeta negativo e estabilidade. Pela microscopia de luz polarizada, ME e ME+OE demonstraram um comportamento isotrópico, sugerindo a formação de sistema microemulsionado. ME e ME+OE apresentaram características não newtonianas, com comportamento pseudoplásico. A força mucoadesiva não foi alterada após a incorporação do OE na ME. As imagens de MET demonstraram estruturas esféricas para a ME, entretanto, as fotomicrografias de ME+OE mostraram possíveis gotículas de OE dentro das estruturas esféricas, indicando a incorporação do OE na ME. O OE apresentou efetiva ação inibitória para as cepas testadas. Sobretudo, frente a cepa padrão de C. albicans, quando o OE foi incorporado a microemulsão (ME+OE) exibiu melhora expressiva da atividade antifúngica com diminuição da CIM (de 500 para 31,2 µg/mL). Para as outras espécies de Candida (C. krusei e C. glabrata) ME+OE não apresentou inibição fúngica. Deste modo, os posteriores ensaios de atividade antifúngica foram realizados com a espécie C. albicans. OE e ME+OE exibem a capacidade de atuar na membrana celular de C. albicans, uma vez que a CIM se mostrou aumentada na presença de ergosterol. OE e ME+OE preveniram a formação de hifa de C. albicans, entretanto o OE foi mais efetivo. A presença de probiótico e patógeno vaginal reduz a formação de hifas de C. albicans. As superfícies revestidas com OE e ME+OE apresentaram-se menos hidrofílicas que o vidro limpo pela medida de ângulo de contato. ME+OE apresentou redução expressiva da adesão de C. albicans sobre superfície de vidro em câmara de fluxo. Sobretudo, após a passagem da interface ar-líquido (bolha de ar) foi observado efetivo destacamento das leveduras na superfície de vidro revestida com ME+OE. O OE e ME+OE inibiu o biofilme de cepa padrão e clínica de C. albicans, porém ressalta-se que o OE foi capaz de promover ausência de crescimento fúngico (UFC/mL) em ágar (plaqueamento). O biofilme monotípico de L. acidophilus exibiu alta atividade metabólica bacteriana frente ao OE e ME+OE. O OE mostrou padrão aceitável de citotoxicidade em linhagem celular HaCat. O OE e ME+OE demonstraram baixa toxicidade em modelo alternativo de Artemia salina. Em ensaio in vivo de CVV o ME+OE conferiu a cura em 100% dos animais no terceiro dia de tratamento e o OE ocasionou a cura em 50% dos animais no segundo dia de tratamento. A utilização da nanotecnologia como a ME, para a incorporação do OE, aprimora a atividade antifúngica do OE de C. nardus sobre células planctônicas e promove inibição da formação de hifas em presença de probiótico e patógeno vaginal. Além disso, o ME+OE promove a prevenção de adesão de C. albicans em câmara de fluxo em placas paralelas somada ao aumento do destacamento de leveduras aderidas em superfície de vidro revestida com ME+OE. Adicionalmente, o OE e ME+OE inibem os biofilmes monotípicos e heterotípicos. Sobretudo, o OE incorporado em ME exibe relevante efeito em ensaio in vivo de CVV com camundongos, sendo uma alternativa promissora no controle de infecções causadas por C. albicans.