Ação do forskolin em diferentes fases da produção in vitro: implicação na meiose oocitária e na vitrificação de embriões bovinos - Paschoal, Daniela Martins [UNESP] (2013)
O forskolin eleva as concentrações de adenosina monofosfato cíclica (cAMP) por meio da ativação da adenilato ciclase. Esse experimento possuiu o objetivo de utilizar o forskolin para melhorar a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos. No Experimento I o forskolin foi adicionado no meio de maturação in vitro (MIV) com o objetivo de bloquear a meiose nuclear induzindo sua sincronização com a maturação citoplasmática. O Experimento II possuiu o objetivo de induzir uma lipólise química em embriões do D 6 a partir da utilização do forskolin, diminuindo sua sensibilidade após a vitrificação. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6 horas na presença de três concentrações de forskolin: 0,025 mM; 0,05 mM; 0,1 mM e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de forskolin por 18 horas. Após esse tempo os oócitos foram fertilizados e cultivados in vitro. Foi avaliado o estágio de maturação nuclear, a atividade e distribuição mitocondrial, a ultraestrutura oocitária, contagem do número de células e a apoptose celular. O tratamento com forskolin por 6 horas não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, após a retirada do bloqueio e maturação por 18 horas um maior número de oócitos tratados com 0,1 mM de forskolin se encontrou em MI (P<0,05). Não houve diferença com relação a atividade e distribuição mitocondrial nos oócitos, no entanto a maior concentração da droga levou a alterações ultraestruturais nos oócitos, com excesso de metabolização lipídica e desorganização do citoesqueleto. Apesar disso, não se observou diferença na taxa de produção de blastocistos avaliados no D 7, bem como no número total de células íntegras dos embriões. Entretanto, observou-se uma maior taxa de apoptose no grupo de blastocistos produzidos a partir de oócitos bloqueados com a maior concentração...