Efeito modulador da progesterona, vitamina D e silibinina sobre inflamassomas em monócitos de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia - Matias, Mariana Leticia (2019)
A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez, associada com inflamação sistêmica exacerbada, o que poderia ser dependente da deficiência de fatores reguladores, como a silibinina (SB), progesterona (PG) e vitamina D (VD), que são capazes de modular essa resposta inflamatória. O objetivo do trabalho foi avaliar, in vitro, o efeito modulador da SB, PG e VD sobre os inflamassomas NLRP1 e NLRP3 e sobre a via de sinalização dependente de TLR4-MyD88 em monócitos de gestantes portadoras de PE e em linhagem celular de monócitos humanos THP-1. Monócitos obtidos do sangue periférico de 20 gestantes com PE, 20 gestantes normotensas e células THP-1 foram cultivados na presença ou ausência de urato monossódico (MSU), hialurona (HA), SB, PG ou VD por diferentes períodos: a) por 30 min para determinação da fosforilação de NF-κB e para expressão dos fatores intra-citoplasmáticos NF-κB e IκBα por citometria de fluxo, b) por 4h para a expressão gênica de TLR4, MYD88, NFKB1, NLRP1, NLRP3, CASP1, IL1B, IL18, TNF e IL10 analisada por RT-qPCR e c) por 18h para a determinação da concentração das citocinas IL-1β, IL-18, TNF-α e IL-10 por ELISA e para expressão do receptor de superfície TLR4 por citometria de fluxo. Foram determinados os níveis plasmáticos de ácido úrico, PG e VD em gestantes pré-eclâmpticas e normotensas. Os resultados foram analisados por meio de testes paramétricos e não-paramétricos com nível de significância de 5%. Os níveis plasmáticos de PG e VD foram significativamente menores, enquanto os de ácido úrico foram maiores em gestantes com PE quando comparados com gestantes normotensas. Monócitos de gestantes com PE apresentaram maior ativação endógena dos genes inflamatórios (TLR4, MYD88, NFKB1, NLRP1, NLRP3, CASP1, IL1B, IL18 e TNF) e menor de IL10 em comparação com as gestantes normotensas. A expressão de TLR4 e NF-κB foi maior, enquanto IκBα foi menor no grupo de gestantes com PE quando comparada à de gestantes normotensas. A maior atividade basal de NF-κB fosforilado observada em monócitos de gestantes com PE apresentou-se menor após o tratamento dessas células com SB, PG e VD. O estímulo com MSU e HA aumentou a expressão dos genes e proteínas relacionados à inflamação e diminuiu a de IL-10 em gestantes com PE, enquanto o tratamento com SB, PG e VD teve efeito imunomodulador, diminuindo essa expressão. No grupo PE, os estímulos com MSU e HA aumentaram a expressão de NF-κB e diminuiram a de IκBα. Por outro lado, o tratamento dos monócitos com SB, PG e VD induziu diminuição de TLR4 e NF-κB e aumento de IκBα. Células THP-1 apresentaram perfil de resposta imunológica semelhante aos monócitos de gestantes pré-eclâmpticas, após estímulo com MSU e HA e tratamento com SB, PG e VD. Os resultados sugerem a participação de MSU e de HA na resposta inflamatória sistêmica da PE e que o tratamento com SB, PG ou VD é capaz de modular essa inflamação, demostrando o papel imunomodulador dessas substâncias na regulação da resposta inflamatória na PE.