Avaliação da ação da melatonina em células-tronco tumorais mamárias RE-positivas tratadas com disruptores estrogênicos: verificação da via do receptor de estrógeno mediada pelo gene OCT 4 - Lopes, Juliana Ramos [UNESP] (2016)
As neoplasias mamárias são os tumores de maior ocorrência em mulheres no mundo. A alta incidência deste tipo tumoral deve-se a um conjunto de fatores, entre eles o uso de hormônios, como o estrógeno e a exposição a produtos químicos, entre eles o Bisfenol A (BPA). Apesar da introdução de tratamentos mais efetivos para o câncer de mama, muitas vezes ocorre recorrência e/ou crescimento do tumor, invasão e metástase. As “células-tronco tumorais” (CTTs) vem sendo estudadas em tumores humanos nos últimos anos, consideradas as responsáveis pela recorrência do tumor e resistência a terapias. Devido ao determinante papel das CTTs, é importante a identificação de fatores que controlam sua proliferação. Estudos identificaram o fator de transcrição OCT4 (octamer-binding transcription factor 4), como um dos responsáveis pela auto-renovação e manutenção da pluripotência das células-tronco. Dessa forma, o estudo de potenciais fármacos que atuem sobre esta população específica no câncer de mama tem especial interesse. A melatonina, parece apresentar efeitos oncostáticos no entanto, pouco se sabe sob sua ação terapêutica sobre as células-tronco tumorais mamárias. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da melatonina sobre a regulação do marcador de células-tronco OCT4 pelo receptor de estrógeno em células-tronco tumorais mamárias, após o tratamento com estrógeno e bisfenol A. Para o estudo, as células de câncer de mama humano MCF-7 e MDA-MB-231 foram submetidas ao cultivo tridimensional de mamosferas, representando as células-tronco. As CTTs foram cultivadas em suspensão celular ou em crescimento independente de ancoragem. Simultaneamente, as mamosferas foram tratadas com 1 mM melatonina, 10 nM estrógeno e/ou com 10 µM bisfenol A. Ao final, foi avaliado o efeito da melatonina, estrógeno e bisfenol A sobre o crescimento celular, através da contagem do número de células, mensuração do tamanho das mamosferas e por meio do ensaio de viabilidade celular MTT. Além disso, a expressão gênica e proteica do OCT4 e do receptor de estrógeno (RE) foi avaliada por PCR em tempo real, western blotting e imunocitoquímica, respectivamente. Foi avaliada também a ligação do receptor de estrógeno ao gene OCT4 através do Ensaio de Imunoprecipitação da Cromatina (ChIP). Foi observado que o aumento no número e no tamanho das mamosferas induzidos pelo estrógeno ou BPA foi reduzido pelo tratamento com melatonina (P<0,05). Além disso, a ligação do receptor de estrógeno ao gene OCT4 foi reduzida, acompanhada por uma redução na expressão do OCT4 e do receptor de estrógeno (P<0,05). Nossos resultados demonstram que a melatonina é eficaz no controle da proliferação das células-tronco tumorais mamárias in vitro, atuando na via do receptor de estrógeno, demonstrando seu potencial uso terapêutico no câncer de mama.