Produção, purificação parcial e caracterização de xilanase produzida por fungo filamentoso - Senna, Sirlene do Nascimento (2018)
Os fungos filamentosos são microrganismos muito eficientes na produção de xilanases, enzimas que apresentam diversas aplicações biotecnológicas, tais como, branqueamento do papel, aditivos em rações animais, panificação, extração e clarificação de sucos, entre outras. Este trabalho teve como objetivo selecionar e otimizar as condições de cultivo do microrganismo de maior potencial para a produção de xilanase, caracterizando a mesma bioquímicamente, e purificar parcialmente a de interesse. Onze fungos isolados em áreas de Cerrado, no estado do Mato do Grosso Sul, com crescimento a 30 ºC, foram reativados para ensaio de produção da xilanase. A maioria dos isolados produziram xilanase por cultivo em estado sólido, inicialmente, utilizando o farelo de trigo como substrato, se destacando três espécies identificadas como IPS8.2, IPS14.3F e IPS 9.3. O fungo IPS8.2 foi selecionado para estudo posteriores e identificado como Gongronella butleri com base sequenciamento de rDNA por ITSs. Além do cultivo inicial com farelo de trigo, esta espécie foi submetida ao efeito de diferentes fontes de carbono com outros substratos, tais como: casca de maracujá, serragem, papelão, casca de soja, sabugo triturado, bagaço de cana-de-açúcar, braquiária, sabugo de milho e xilana, nos cultivos em estado sólido (CES) e submerso (Csm). Os resultados obtidos nessa etapa não sobrepuseram à utilização inicial, em farelo de trigo em CES. Partindo desses resultados buscou-se verificar o efeito da concentração de sais, umidade e tempo no cultivo em estado sólido. Entre as condições testadas, Gongronella butleri IPS8.2 obteve sua melhor produção de xilanase em 72 horas de cultivo, com água destilada e 70% de umidade. A solução enzimática bruta, foi submetida à purificação parcial por troca iônica em Hitrap Q-Sepharose FF. As atividades da xilanase bruta e parcialmente purificada foram favorecidas à 45 ºC e pH 5,5. A enzima parcialmente purificada apresentou uma estabilidade de temperatura e uma faixa de estabilidade de pH inferiores à amostra bruta. A maioria dos íons utilizados não inibiu a xilanase bruta e à parcialmente purificada. Para ambas as condições testadas, o íon Ag+ foi o que proporcionou maior diminuição na atividade da enzima em estudo.