Potencial de diferenciação induzido e espontâneo de células tronco mesenquimais oriundas de tecido adiposo e medula óssea de equinos (Equus caballus) - Galhardo, Elaine Cristina [UNESP] (2016)
A medula óssea (MO) e o tecido adiposo (TA) são fontes viáveis e amplamente estudadas de células tronco mesenquimais (CTMs), cujo alto potencial de multiplicação e diferenciação, aliado à característica imunomoduladora, permitem ampla aplicação em Medicina Veterinária com resultados satisfatórios na reconstrução de tecidos danificados. Diversos protocolos são descritos para isolamento e cultivo de CTMs, com divergência na porcentagem de suplementação de soro fetal bovino (SFB), componente xenogênico que é indicado como possível facilitador do processo de diferenciação in vitro. Este estudo analisou a proliferação e diferenciação induzida e não induzida de CTMs-TA e MO cultivadas em 10 ou 20% de SFB, e demonstrou que CTMs cultivadas em 20% de SFB apresentam maior eficiência de proliferação in vitro, e que a proliferação in vitro das CTMs-TA são superiores em comparação à CTMs-MO. O potencial de diferenciação das CTMs-TA e MO foi caracterizado por análise citológica e ultraestrutural após ensaio de diferenciação induzido por meios comerciais específicos e ensaio não induzido, onde as CTMs foram mantidas apenas nos meios basais. Esses ensaios foram também submetidos a avaliação de expressão gênica por qRT-PCR, porém estes dados não foram conclusivos. Aparente formação de matriz extracelular nas CTMs-TA cultivadas em 10% de SFB e não induzidas a diferenciação sugere possível ocorrência de diferenciação espontânea nesse grupo, o que foi evidenciado pela análise ultraestrutural. Adicionalmente, foi realizada caracterização imunofenotípica das CTMs-TA, com o objetivo de construir um banco de células aplicáveis in vivo. Em conclusão, a importância do SFB para o cultivo de CTMs foi demonstrada pelos resultados de proliferação superiores em células cultivadas em 20% de SFB, bem como a superior proliferação das CTMs-TA. A concentração de 10% de SFB no meio de cultivo pode favorecer a ocorrência de diferenciação espontânea das CTMs-TA, conforme demonstrado pela análise ultraestrutural. O isolamento, cultivo e caracterização de CTMs-TA foram eficientes e possibilitaram a formação de um banco de células viáveis para aplicação in vivo.