Transplante interespecífico de espermatogônia tronco de piracanjuba Brycon orbignyanus - López, Lucia Suárez (2022)
A piracanjuba (Brycon orbignyanus) é uma espécie em categoria de perigo de extinção devido a ações antrópicas, como o desmatamento ciliar e a fragmentação dos rios. A associação das biotécnicas de geração de bancos géneticos in vitro, utilizando células germinativas primordiais ou células germinativas (espermatogônia ou oogônia-tronco), e do transplante destas células em receptores estéreis é uma estratégia plausível a ser utilizada em ações de conservação e reconstituição de espécies ameaçadas de extinção. O objetivo do presente trabalho foi de estabelecer procedimentos de isolamento e criopreservação de espermatogônias-tronco de piracanjuba, bem como o transplante de espermatogônias-tronco em recepitores estéreis, visando a geração de quimera germinativa. As espermatogônias-tronco foram isoladas utilizando a dissociação enzimática, gradiente de desindade de Percoll e o plaqueamento diferencial, sendo obtido neste processo 66 ± 0,01% de pureza. Espermatogônias-tronco oriundas das etapas de purificação foram caracterizadas quanto a expressão relativa de ddx4, sendo obtida maior expressão relativa, cerca de 3,5 vezes, em células oriundas do gradiente de percoll, em relação as células após plaqueamento diferencial e do tecido gonadal. Portanto, células oriundas do gradiente de percoll foram indicadas para as etapas de transplante e criopreservação in vitro. Experimentos de criopreservação de espermatogônias-tronco foram realizados e a melhor solução crioprotetora obtida foi o propanodiol a 1 M (P = 1,000). Machos adultos e juvenis diploides de Astyanax altiparanae foram utilizados nos experimentos de esterilização química para obtenção de receptores estéreis. Outro experimento de esterilização foi realizado utilizando juvenis triploides de A. altiparanae utilizando a associação da manipulação cromossômica e esterilização química. A associação das técnicas de hibridação entre espécies e manipulação cromossômica foi realizada para a obtenção dos receptores estéries de adultos híbridos triploides (A. altiparanae × A. fasciatus). Pelos resultados obtidos nos experimentos de esterilização, os juvenis triploides e os híbridos adultos triploides foram indicados como os melhores receptores estéreis para a etapa de transplante de espermatogônias-tronco. Os machos “juvenis” triploides, tratados previamente com busulfan, foram transplantados com espermatogônias-tronco recém isoladas, enquanto que os machos híbridos adultos triploides foram transplantados com células recém isoladas e células criopreservadas. No transplante realizado em “juvenis” triploides foram visualizadas células PKH26 positivas até os 80 dias após transplante. Nos receptores híbridos adultos triploides, transplantados com células recém isoladas e criopreservadas, foram visualizadas espermatogônias se proliferando nos testículos dos receptores aos 20 dias após transplante. Os resultados obtidos de isolamento e criopreservação de espermatogônias-tronco e o posterior transplante via papila urogenital, utilizando os receptores “juvenis” triploides tratados com busulfan, e híbridos adultos triploides são inéditos, inovadores e promissores para obtenção de quimera germinativa funcional. Consequentemente, os procedimentos estabelecidos neste estudo poderão ser aplicados futuramente, em ações de conservação e reconstituição da piracanjuba, em caso de extinção.