Expressão, purificação e análise da atividade catalítica das SMases D de Austwickia chelonae, Arcanobacterium haemolyticum, Corynebacterium pseudotuberculosis e Trichophyton rubrum. - Romano, Fernanda Serrano (2020)
A esfingomielinase D (SMase D) é uma hidrolase fosfórica que cliva esfingomielinas em ceramida e fosforilcolina, alterando a fluidez, permeabilidade e cargas da membrana citoplasmática além de estar relacionada à necrose de macrófagos e inflamação pulmonar. Além disso, é conhecida por ser uma enzima dermonecrótica, que permite a disseminação patogênica pelo hospedeiro. Embora muitas vezes classificadas como fosfolipases D, não apresentam a sequência HKD conservada na família dessas enzimas, as quais podem ser encontradas nos organismos Trichophyton rubrum, Arcanobacterium haemolyticum, Austwickia chelonae e Corynebacterium pseudotuberculosis, além de outros organismos. Esses quatro micro-organismos tiveram seus protocolos de expressão e purificação em larga escala estabelecidos e análises de viabilidade celular utilizando linhagens de células HaCaT demonstraram o potencial de toxicidade desses quatro organismos e permitiram encontrar um possível inibidor (doxiciclina) para futuros testes in vivo. Estudos de catálise enzimática por RMN demonstram o padrão de velocidade catalítica dessas proteínas na presença do substrato lisofosfatidilcolina (LPC).