Pré-maturação in vitro de oócitos bovinos com NPPC e vesículs extracelulares obtidas em diferentes fases da onda de crescimento folicular - Nunes, Giovana Barros [UNESP] (2022)
Oócitos bovinos submetidos à maturação in vitro (MIV) retomam espontaneamente a maturação nuclear, no entanto, este padrão não é observado em relação às maturações citoplasmática e molecular. Desta forma, tais oócitos constituem uma população heterogênea em relação aos eventos que compõem a maturação oocitária para aquisição de competência. Este estudo propôs avaliar os efeitos de um sistema de pré-maturação in vitro (préMIV) de complexos cumulus oócitos (CCOs) bovinos com o uso do bloqueador precursor do peptídeo natriurético tipo C (NPPC) e com vesículas extracelulares (VEs) obtidas de folículos em diferentes fases do desenvolvimento [pré-desvio ~ 7 mm (PreDev); desvio ~8,5 mm (DevF1); pós-desvio ~12 mm (PostDev) e; pré-ovulatório > 12 mm (PreOv)], sobre: (1) a captação das VEs pelas células dos CCOs; (2) a transferência de RNA das VEs para os oócitos; (3) o padrão de compactação da cromatina e aquisição de competência oocitária para o desenvolvimento embrionário e; (4) parâmetros de qualidade dos embriões provenientes deste sistema. Ao final do período de 8 horas do sistema de préMIV foi possível evidenciar, em todos os grupos tratados com VEs (PreDev, DevF1, PostDev e PreOv), a captura das mesmas pelas células dos CCOs, bem como a transferência de RNA proveniente destas vesículas para o ooplasma, sendo que os oócitos do grupo DevF1 apresentaram concentração de RNA aumentada no ooplasma, quando comparados aos oócitos dos demais grupos (P<0.05). Em relação ao padrão de compactação da cromatina (vesícula germinativa – VG – de 0 a 3) dos CCOs, independente do grupo avaliado (Imaturo – imediatamente após a remoção do folículo ovariano, Controle – meio de préMIV sem adição de VEs, PreDev, DevF1, PostDev e PreOv), não houve diferença (P>0.05) quanto às categorias VG0 e VG2; já as categorias de VG1e VG3 diferiram entre os grupos (P<0.05), sendo que o grupo Imaturo apresentou maior taxa de oócitos em VG1 (61,9%), em relação a todos os grupos, e menor taxa de oócitos em VG3 (5,7%) quando comparado aos grupos PreDev (45,4) e PostDev (48,1%) (P<0.05). O cultivo de préMIV associado ou não às VEs não promoveu aumento das taxas de clivagem (Controle 82%, PreDev 81,5%, DevF1 75%, PostDev 76% e PreOv 76,9%) (P>0.05) e desenvolvimento embrionário (Controle 43,6%, PreDev 38,6%, DevF1 48,1%, PostDev 38,3% e PreOv 40,4%) (P>0.05). Em relação aos parâmetros de qualidade embrionária, o grupo PostDev apresentou maior número de blastômeros em relação ao grupo Controle (P<0.05), porém as avaliações de potencial de membrana mitocondrial e porcentagem de células apoptóticas não diferiram, independente do tratamento (P>0.05). Concluímos, portanto, através dos achados na literatura, que o trabalho aqui apresentado é o primeiro a utilizar um sistema de pré-maturação in vitro de complexos cumulus oócitos bovinos enriquecido com vesículas extracelulares e, evidenciamos, a partir dos resultados que o sistema permitiu a interação entre as células do complexo cumulus oócitos e vesículas extracelulares, independente da fase do desenvolvimento folicular em que as vesículas foram obtidas. Adicionalmente, foi possível evidenciar melhorias na qualidade dos embriões sugerindo efeitos benéficos deste sistema.