Construção de uma Biblioteca de Anticorpos Anti-ZIKA Vírus - Santos, Francielle Martins (2019)
Bibliotecas conformacionais de anticorpos vem constituindo importantes ferramentas na investigação científica de imunoglobulinas expressas em diferentes situações biológicas incluindo patologias. O conhecimento e elucidação estrutural de anticorpos diferenciais produzidos em patologias distintas pode representar ferramenta molecular fundamental para a intervenção na fisiopatologia da doença; incluindo diagnóstico diferencial, identificação de biomarcadores, terapêutica baseada em imunoglobulinas para bloqueio de patógenos bem como, contribuir para a constituição de painéis de anticorpos capazes de identificar epítopos agregando, também, informações para avanços no desenvolvimento de vacinas. A maior dificuldade atualmente reportada na literatura científica é a obtenção in vitro dos fragmentos Fab (Fragment Antigen Binding) devido à ausência de informações metodológicas das fases experimentais necessárias à construção do Fab, substrato essencial a construção de bibliotecas de anticorpos. Uma abordagem ainda inédita neste contexto é o desenvolvimento de uma metodologia experimental eficiente para a obtenção de bibliotecas de Fab na infecção pelo vírus ZIKA (ZIKV). A infecção pelo vírus ZIKA (ZIKV) vem sendo associada à casos de microcefalia em neonatos de gestantes infectadas e síndrome de Guillain-Barré, a neutralização viral baseada em anticorpos dirigidos contra epítopos específicos é pouco conhecida, a maioria dos estudos se referem a outros Flavivirus. A resposta imunológica humoral é essencial a proteção contra os Flavivirus, por isso é importante conhecer os mecanismos desenvolvidos pelo sistema imunológico do hospedeiro na presença do vírus. Assim, a finalidade deste estudo foi a criação de uma metodologia experimental, com delineamento ainda inédito na literatura, para obtenção do Fab a partir de pacientes com infecção ativa pelo ZIKV e, a obtenção de uma biblioteca de Fab dos anticorpos expressos nestes pacientes. A metodologia utilizada no presente estudo foi adaptada de Andris-Widhopf, et al. (2000) e Barbas et al. (2001). Os resultados obtidos mostraram o desenvolvimento de uma nova metodologia para construção do Fab anti-ZIKV, sugerindo que o detalhamento metodológico é essencial para o sucesso na obtenção da biblioteca, o que inexiste nos artigos anteriores que abordam a construção de bibliotecas conformacionais de anticorpos. Em conclusão a construção do Fab e, de bibliotecas de anticorpos apresentam variabilidades individuais na dependência do patógeno e, das diferentes etapas experimentais do processo.