Avaliação de métodos de lise celular de sporobolomyces ruberrimus - Pennacchi, Mariana Gomes Clemente (2014)
Os carotenoides são biomoléculas de relevante interesse econômico devido às propriedades biológicas que apresentam. Podem ser sintetizadas por plantas e microrganismos, dentre os quais, se destacam as leveduras vermelhas. O processo de recuperação destes pigmentos intracelulares envolve uma etapa crucial de lise celular. Assim, o presente estudo visou avaliar diferentes métodos de lise celular da levedura Sporobolomyces ruberrimus a fim de otimizar a recuperação de pigmentos intracelulares. A primeira etapa da pesquisa, realizada através de um planejamento fatorial 23 com ponto central visou avaliar qual ou quais dos parâmetros investigados (concentração celular, gradiente de agente de lise e velocidade de agitação) afetariam, de forma mais significativa a quantidade de carotenoides totais recuperados. O estudo inicial indicou que a pesquisa deveria ser realizada com uma concentração celular fixa. Então foi determinada a concentração celular de 500 mg/L e o novo planejamento fatorial 22 com ponto central foi definido. As variáveis independentes avaliadas aplicando-se vórtex + agentes de lise foram otimizadas para as condições estudadas em 135 mg de pérolas vidro e 1230 rpm de velocidade de agitação para o método vórtex + pérolas de vidro. Já o método químico ‘clássico’ (dimetilsulfóxido) considerado pela literatura apresentou como variável independente significativa somente a concentração de agente de lise, cujo valor otimizado encontrado foi de 2,7 mL de DMSO. O mesmo planejamento e condições foram aplicados na utilização do equipamento ‘planetary mill’, sendo que a eficiência do processo independe de qualquer um dos parâmetros avaliados, permitindo a utilização de condições brandas de processamento (135 mg de agente de lise e 200 rpm de velocidade de agitação). Quanto à lise celular, as análises microscópicas diretas indicaram que os métodos mecânicos de lise celular estudados mostraram-se mais eficientes no sentido da dilaceração das células e que a extração celular de carotenoides empregando-se o método químico com DMSO ocorre, possivelmente, apenas através da permeabilização celular.