Expressão do gene ASYMMETRIC LEAVES1 (AS1) em explantes radiculares de Passiflora edulis Sims e organogênese in vitro em Passiflora setacea D.C. (Passifloraceae) - Vieira, Lorena Melo (2011)
O presente estudo teve como objetivos caracterizar a expressão do gene ASYMMETRIC LEAVES1 (AS1), via hibridização in situ, durante a regeneração in vitro de segmentos radiculares de Passiflora edulis Sims, espécie comercialmente cultivada, e estabelecer um protocolo reproduzível via organogênese in vitro em Passiflora setacea, espécie silvestre. Explantes radiculares de P. edulis foram cultivados em meio MS, para indução de organogênese de ramos, suplementado com 2,35 μM de BA. Para detecção do gene PeAS1 pela hibridização in situ foi produzido uma sonda antisense, utilizando-se fragmentos de cDNA com 900 pb. A visualização do sinal de hibridização foi obtida utilizando-se a solução comercial de NBT/BCIP como substrato para fosfatase alcalina. Após 12 dias em meio de indução, meristemóides foram formados, via organogênese direta. Nos meristemóides, a reação positiva a hibridização in situ por imunodetecção evidenciou a presença de transcritos do gene PeAS1. Em gemas formadas a partir dos meristemóides, após 25 dias de cultivo, o gene PeAS1 foi expresso nas regiões do domo e primórdios foliares. Para a indução de organogênese in vitro em P. setacea, explantes foliares, hipocotiledonares e radiculares foram cultivados em meio MS suplementado com 4,44 μM de Benzilaminopurina (BA); 2,27 μM de Tidiazuron (TDZ) ou em combinação com BA (4,44 μM) + TDZ (2,27 μM), sob dois regimes luminosos (16h de luz e escuro). No tratamento controle, não houve adição de fitorregulador. Os padrões de regeneração direta e indireta foram observados em explantes hipocotiledonares e radiculares. Em explantes foliares, a regeneração ocorreu somente a partir de calos. Nos hipocótilos, os meios suplementados por BA na luz ou BA+TDZ em ambas as condições de incubação proporcionaram maior média de brotações. Em explantes radiculares, a maior frequência de regeneração foi observada quando cultivados em meio com BA+TDZ na luz porém, nessas condições, a análise de citometria de fluxo constatou aumento na quantidade média de DNA nuclear, em dois de cinco regenerantes analisados, quando comparado ao material oriundo de sementes. A mesma composição do meio e condição de incubação não induziu poliploidia em regenerantes oriundos de explantes hipocotiledonares. Conclui-se que o tipo de explante, a composição do meio de cultivo e as condições de incubação tiveram influência na morfogênese in vitro de Passiflora setacea. O presente trabalho relata, pela primeira vez, informações de nível molecular do processo organogênico a partir de explantes radiculares em P. edulis, bem como a obtenção de organogênese in vitro e a caracterização da estabilidade genética de regenerantes da espécie silvestre P. setacea, possibilitando a sua utilização em programas de melhoramento genético.