Desenvolvimento de sistemas de genotipagem multilocos semi- automatizados, baseados em microssatélites, e sua aplicação em espécies do gênero Eucalyptus - Kirst, Matias (1999)
Foram desenvolvidos três sistemas de genotipagem multilocos (sistemas Multiplex) semi-automatizados, baseados na amplificação e análise simultânea de locos microssatélites via florescência, para análise genética de espécies do gênero Eucalyptus. Tabelas de frequências alélicas e estimativas do conteúdo de informação genética foram geradas para seis espécies comercialmente importantes do gênero Eucalyptus (subgênero Symphyomyrtus). Inicialmente, microssatélites desenvolvidos a partir de genótipos de E. grandis e E. urophylla foram avaliados quanto à especificidade de amplificação. Dentre os locos que apresentaram boa qualidade de amplificação, 11 foram selecionados para o desenvolvimento de sistemas Multiplex. Três sistemas Multiplex, comportando cada um a análise simultânea de três locos, foram selecionados. Foi estudado o tamanho mínimo de amostra necessário para se obterem estimativas acuradas da heterozigosidade de cada loco. Para isso, foram genotipados 192 indivíduos de E. grandis provenientes de uma população de melhoramento. Com essa informação, avaliou-se o comportamento de estimadores para heterozigosidade esperada com vários tamanhos de amostra, analisando-se a sua variância por meio da sua fórmula exata e por reamostragem numérica. Concluiu-se que uma amostra de 64 indivíduos dessa população seria satisfatória para estimar a heterozigosidade esperada com boa precisão. Os três sistemas Multiplex foram utilizados para genotipar indivíduos provenientes de cinco procedências de E. grandis. Com os dados genotípicos, foram construídas tabelas de frequências alélicas para cada loco e procedência, além de serem registrados 0 número de alelos/loco e a amplitude alélica e estimados os parâmetros heterozigosidade esperada, conteúdo de informação de polimorfismo, probabilidade de identidade e poder de exclusão, os quais indicaram que os locos utilizados possuía alto conteúdo de informação genética. Foram ainda estimadas as distâncias genéticas de Nei entre as procedências; uma AMOVA realizada entre as procedências indicou variação significativa entre elas, embora a maior porção da variabilidade fosse encontrada dentro de procedências. Em seguida, os sistemas Multiplex foram otimizados e caracterizados para outras cinco espécies do gênero Eucalyptus: E. camaldulensis, E. dunnii, E. globulus, E. saligna e E. urophylla. As estimativas dos parâmetros de informação genética da maioria dos locos indicaram que eles são apropriados para genotipagem de indivíduos dessas espécies. Finalmente, os sistemas Multiplex foram utilizados na avaliação de uma população de melhoramento de E. urophylla e de uma coleção de clones-elite, em que foi possível a detecção de erros de identificação do material genético, além de uma avaliação da diversidade genética e da similaridade entre clones.