Formação de biofilmes em meio biótico e abiótico por Escherichia coli isoladas de mastite bovina na presença de antimicrobianos - Silva, Vítor de Oliveira (2013)
Escherichia coli é um micro-organismo de origem ambiental altamente adaptativo e sua habilidade em formar biofilmes em determinadas condições pode ser fundamental para sua resistência a tratamentos com antimicrobianos. O objetivo desse estudo foi avaliar os perfis de expressões dos genes luxS, fliC, csgA e fimA envolvidos com a formação de biofilmes em E. coli obtidos de leite mastítico na presença de antimicrobianos em meio biótico e abiótico. Foi avaliado o perfil genético de 27 isolados por meio de gel de eletroforese em campo pulsado (PFGE) com a digestão enzimática XbaI. Quatro isolados de E. coli , dois fortes produtores de biofilmes (GPB) e dois fracos produtores (FPB) que possuíam os genes da sintase do autoindutor-2 (luxS), flagelina (fliC), subunidade maior da fímbria curli (csgA) e subunidade maior da fímbria do tipo I (fimA) foram selecionados por PCR convencional. Foi avaliada a concentração inibitória mínima (MIC) dos antimicrobianos para realização dos demais testes com a concentração de ½ MIC. A produção de biofilme foi detectada na presença de antimicrobianos e visualizada em microscopio eletrônico de varredura (MEV). Foram realizados ensaios de adesão/invasão de células bacterianas em cultivo de células alveolares mamárias bovinas (MAC-T) na presença de antimicrobianos, quantificados em UFC/mL, e visualizadas por meio de microscopia confocal. Posteriormente, foram analisados os perfis de expressão dos genes luxS, fliC, csgA e fimA em diferentes tempos e em superfície de inoculação abiótica e biótica. Nove (I a IX) grupos filogenéticos diferentes com similaridade >90 % foram identificados pelo PFGE. Os resultados revelaram a presença de luxS, fimA e csgA em todos os 27 isolados, enquanto o gene fliC foi detectado em 16. As MICs variaram entre 0,05 a 8 μg/mL, sendo os maiores valores obtidos para gentamicina (8 μg/mL) e para ampicilina (6 μg/mL). A enrofloxacina e o cotrimoxazol induziram a formação de biofilme em pelo menos um isolado FPB, ampicilina e gentamicina em um GPB. Também foi observado efeito reduxii tor da enrofloxacina e cotrimoxazol em pelo menos um isolado GPB. Não foi observado aumento na capacidade de adesão/invasão dos isolados de E. coli na presença de antimicrobianos, no entanto observou-se aumento na internalização do isolado FPB quando tratado com os antimicrobianos através da microscopia confocal. Os quatro genes foram diferencialmente expressos quando submetidos à concentração de ½ MIC dos antimicrobianos com alterações da ordem de 1,5-22 vezes. O crescimento em superfície biótica favoreceu a expressão dos genes luxS e fimA em relação à abiótica. A concentração subinibitória dos antimicrobianos estudados foi capaz de induzir a formação de biofilmes por alguns isolados, além de induzir a invasão às células hospedeiras, situação que poderia estar ocorrendo in vivo, resultando em um reservatório de bactéria no úbere do animal, o que poderia explicar também, o crescente aumento de casos de mastites persistentes nos rebanhos.