Análise de folatos em hortaliças folhosas por cromatografia líquida de alta eficiência, com detecção por fluorescência - Della Lucia, Ceres Mattos (2009)
A baixa ingestão de folatos tem sido apontada como possível causa de doenças graves que atingem o homem, como as doenças cardíacas, o câncer e as malformações congênitas. Informações na literatura sobre a concentração de folatos em hortaliças são escassas e muitas vezes contraditórias, devido às dificuldades associadas à análise dessa vitamina, que por sua vez estão relacionadas à sua baixa estabilidade, presença em pequenas concentrações em sistemas biológicos, complexos procedimentos de extração e variedade de formas. Esse estudo teve como objetivo otimizar uma metodologia para determinação da concentração natural de diferentes formas de folatos (tetraidrofolato THF, 5- metiltetraidrofolato 5-MTHF e 5-formiltetraidrofolato 5- FTHF) em hortaliças de elevado consumo no Brasil e cultivadas em Viçosa, MG (couve, espinafre, mostarda, floretes e folhas de brócolis). Visou ainda comparar as concentrações de folatos entre duas estações do ano (inverno e primavera) e avaliar sua estabilidade a diferentes práticas culinárias comuns de cocção (cocção a vapor, cocção sob imersão em água e refogamento em óleo). A metodologia otimizada no preparo das hortaliças consistiu de homogeneização das mesmas em um sistema tampão (tampão fosfato 0,1 M, pH 6,0), seguido por aquecimento e centrifugação, procedendo-se a desconjugação enzimática dos poliglutamatos para monoglutamatos, utilizando conjugase proveniente de plasma de rato. Após a fase de extração, o extrato contendo os monoglutamatos foi purificado utilizando coluna de troca iônica. A análise dos folatos foi feita por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), utilizando gradiente de eluição e fase móvel composta de acetonitrila e solução tampão fosfato (30 mM, pH ajustado para 2,3 com ácido fosfórico). Foi utilizado um delineamento inteiramente casualizado com duas estações do ano (inverno e primavera), cinco hortaliças e quatro repetições em cada estação. Realizou-se a análise de variância (α= 5%) para verificar diferenças entre as duas estações. Para verificação de diferenças entre a concentração dos compostos nas hortaliças cruas e submetidas à cocção, foi aplicado o teste t pareado, ao nível de 5% de probabilidade, sendo as hortaliças comparadas duas a duas (hortaliça crua x hortaliça cozida/refogada). Para essa análise, foram consideradas oito repetições (quatro repetições no inverno e quatro na primavera). A concentração média de folatos totais encontrado foi de 549,67 ± 467,07 μg/100 g em couve; 754,57 ± 564,16 μg/100 g em floretes de brócolis; 731,51 ± 384,01 μg/100 g em folhas de brócolis; 241,04 ± 121,80 μg/100 g em espinafre e 568,76 ± 383,20 μg/100 g em mostarda. Não foram encontradas diferenças significativas na concentração de folatos das hortaliças entre o inverno e a primavera. O 5-FTHF foi o isômero encontrado em maior quantidade nas hortaliças estudadas, sendo os floretes de brócolis considerados a melhor fonte desse isômero e o espinafre, a hortaliça que apresentou as menores concentrações. O refogamento em óleo preservou a concentração das três isoformas de folatos em couve, espinafre e mostarda. Por outro lado, a cocção sob imersão em água foi o método que menos preservou a concentração de 5-FTHF e THF em floretes de brócolis (retenção de 17,01% para THF e de 57,68% para 5-FTHF). A cocção a vapor também não se mostrou eficiente na preservação de THF em floretes de brócolis (41,83% de retenção). A metodologia otimizada mostrou-se confiável para determinação simultânea das três formas mais importantes de folatos (THF, 5- MTHF e 5-FTHF) em hortaliças folhosas cruas e cozidas. A estabilidade de folatos mostrou-se fortemente dependente de cada hortaliça, do método de cocção e da forma isomérica. Todas as hortaliças mostraram-se como boas fontes de folatos, sendo que seu consumo pela população deve ser estimulado.