Aspectos da interação entre a proteína TCTP e o potyvírus PepYMV na infecção de tomateiro e Nicotiana benthamiana - Bruckner, Fernanda Prieto (2012)
Os vírus são organismos com genomas pequenos, de organização simples, que codificam em média 3 a 10 proteínas. O sucesso da infecção depende da manipulação da célula pelo vírus, por meio de interações complexas que ocorrem entre fatores virais e fatores do hospedeiro. As modificações induzidas na célula incluem alterações morfológicas, alteração do ciclo celular e na expressão gênica, entre outras. A compreensão dos processos que favorecem a infecção viral passa necessariamente pelo estudo de interações vírus-hospedeiro. No intuito de compreender melhor os processos relacionados à infecção de tomateiros pelo potyvírus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) uma biblioteca subtrativa foi construída 72 horas após a infecção. Diversos genes cuja expressão foi alterada pela infecção foram identificados. Dentre os genes induzidos, se encontra o gene que codifica a Translationally controlled tumor protein (TCTP). A proteína TCTP é altamente conservada em todos os eucariotos. Suas funções estão relacionadas a controle do crescimento e ciclo celular, atividade anti-apoptótica, e resposta a diferentes tipos de estresses abióticos e bióticos. O envolvimento desta proteína na infecção pelo PepYMV ainda não foi estabelecido, porém estudos em uma linhagem de tomateiro transgênica silenciadas para a TCTP, mostraram que as plantas silenciadas apresentam um menor acúmulo de PepYMV, indicando que a TCTP favorece a infecção por este vírus. Neste trabalho, buscou-se avançar na compreensão dos mecanismos que envolvem a TCTP no processo de infecção pelo PepYMV. Plantas de Nicotiana benthamiana silenciadas para TCTP por VIGS (Virus Induced Gene Silence) foram utilizadas para estudar o efeito do silenciamento na infecção viral, sendo que as plantas silenciadas acumularam menos vírus no início da infecção. A expressão individual das proteínas de origem viral em N. benthamiana identificou a P3 e a CP como capazes de induzir a expressão de TCTP em níveis semelhantes aos observados durante a infecção pelo PepYMV, sendo que a expressão da proteína NIb reduziu a expressão de TCTP. A verificação da ocorrência de interações diretas entre a TCTP e as proteínas virais, por ensaio de duplo híbrido, mostrou que a TCTP não interage separadamente com as proteínas de origem viral. A purificação de proteínas de plantas de N. benthamiana, sadias e infectadas, por afinidade com a TCTP identificou diversas proteínas que possivelmente 7 interagem com a TCTP. Assim como no ensaio de duplo híbrido, a interação com proteínas virais não foi detectada. Estes resultados sugerem que o papel da TCTP deve envolver a formação de complexos proteicos entre proteínas virais e da planta, ou favorecer a infecção de forma indireta.