Expressão Heteróloga, Purificação e Avaliação do uso da E-NTPDase (GDPase) de Leishmania major como Antígeno Recombinante no Diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina - Souza, Ronny Francisco de (2009)
A leishmaniose visceral canina é uma doença zoonótica emergente altamente prevalente em países tropicais. Vários estudos têm utilizado proteínas recombinantes em testes sorológicos para o seu diagnóstico. Este trabalho descreve a expressão heteróloga em sistema Escherichia coli BL21 (DE3) pET-21b da GDPase de Leishmania major. A proteína recombinante GDPase (rGDPase) foi expressa com uma cauda Hexa-HIS fusionada no C-terminal e purificada sob condições nativas por cromatografia de afinidade em resina Ni2 + -agarose. Após a otimização da expressão e purificação, antissoro policlonal contra rGDPase de L. major foi produzido e purificado para retirada de anticorpos inespecíficos contaminantes anti-E. coli. A proteín recombinante foi utilizada como antígeno em testes sorológicos (ELISA indireto) contra soros de cães saudáveis ou cães infectados por Leishmania spp. com diferentes formas da doença (assintomáticos, oligossintomáticos ou polissintomáticos). Os estudos indicaram que é possível produzir essa proteína recombinante e que o antígeno recombinante pode ser utilizado nos testes soro diagnóstico, mas deve ser otimizado principalmente no que diz respeito à sua pureza.